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染以馨

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求waters HLB SPE小柱使用心得已有2人参与

想处理细胞外液的盐然后进LC-MS。但是每次都做得很奇怪，有的时候都不成线性。。。。我用的是30μL的柱子，每次上样量是120μL，标曲最高点浓度是0.75μmol/
L。我使用的是别人用过的HBL柱子，活化柱子，分别用甲醇、水600μL，洗4次。上样前我会把水抽干，上样的时候样品不怎么好扩散，一直浮在柱子表面，我就抽啊，给抽下去，压力大概在0.2，wash用5%甲醇水1ML，也是得抽才能下去，我把水抽干以后，再上洗脱液（乙腈异丙醇1ML）。
不知道问题出在哪了，做了好久了，心塞啊啊啊啊啊啊啊啊

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1楼 2016-08-07 10:10:55

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不想漂流

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

文献：Journal of Functional Foods 18 (2015) 344–357
2.4. Identification of the peptides by LC–MS/MS
The sample preparation for HPLC analysis was performed according to procedures previously reported by our group with
minor modifications (Wu et al., 2009). A homemade C18 solid-phase extraction (SPE) column was activated by 1 mL of ACN
and washed with a 0.1% TFA aqueous solution (v/v). The hydrolysate solution was adjusted to pH 2.7 with 10% TFA in water
(v/v) and was then loaded onto the SPE column. Desalting was then performed by loading 500μL of a 0.1% (v/v) TFA aqueous solution, and this desalting step was performed three times.
The desalting was performed 3 times. Then, 1.2 mL of an aqueous solution containing 0.1% (v/v) TFA and 80% (v/v) ACN was used as an elution buffer (three times) to wash the peptides. The eluate was collected, lyophilized and stored at −80 °C until use.

建议仿照这篇文献，使用TFA水溶液溶解样品，再使用含TFA或FA的80%乙腈溶液进行洗脱，这样洗脱比较完全。
也最好不要使用旧的柱子，很可能会有上一次的残留。如果实在想用，不妨用含0.1%TFA的80%乙腈溶液进行洗涤，冲洗TFA后方可使用。（不过怀疑这样能行吗，SPE柱、HLB柱都是一次性的东西）
有人认为TFA会对质谱信息有干扰，近年来我们的做法渐渐把TFA改为FA。其实这两者差别都不大，因为进质谱前通常会用冻干机冻干掉乙腈和TFA。进质谱前再复溶，以获得准确的上样量。如果使用正离子模式，这个时候用请用FA复溶，以获得良好的质谱信号。

说了太多，不知能否看懂