| 查看: 445 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
proteinwang铜虫 (正式写手)
|
[交流]
连接出了怪现象！
|
||
|
各位大虾好，最进进行了2批连接试验，但是结果有点怪，描述一下，大家帮忙看看出了什么问题哦! 质粒载体为pUC18（2.68kb），目的片段为0.9kb（为一抗生素基因），采用单酶切HindⅢ。 puc18和目的片段37度条件下酶切6h，酶切体系按照说明书配制，酶切后对puc18进行了电泳检测，其得到了很好的酶切。目的片段因为酶切下来的片段较小，无法验证酶切结果。 目的片段，试剂盒回收，puc18经80度20min失活内切酶后直接用于连接。 按照T4 DNA连接酶说明操作，过夜连接。CaCl2法转化。因为我的目的片段是一个抗性基因，在含有相应抗生物的平板上筛选到了转化子。 公得到9各转化子，提取质粒DNA，HindⅢ酶切，电泳验证。结果只切出了一条带，条带长度为8Kb。按照推断HindⅢ酶切后应该得到pUC18片段和目的片段为0.9kb，但是却得到了这么大的片段。 利用转化子质粒为模板进行pcR扩增还得到了我的目的片段。 这真是怪了！！ 请大家帮忙分析一下原因吧，谢谢！ 另外，单酶切进行连接时必须进行去磷酸化处理吗？应该怎样操作才能得到比较高的连接和转化效率呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有26人回复
-
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有16人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
请教限项目规定
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2008-11-14 12:32:42
3楼2008-11-14 12:37:03
4楼2008-11-15 02:47:31
proteinwang
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 641.3
- 散金: 152
- 红花: 1
- 帖子: 323
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 230924
- 注册: 2006-03-26
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2008-11-17 10:57:38
6楼2008-11-19 22:21:37
proteinwang
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 641.3
- 散金: 152
- 红花: 1
- 帖子: 323
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 230924
- 注册: 2006-03-26
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2008-11-20 19:24:02