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kd22309

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR老是批出阴性对照,帮分析一下

我最近一直用SYBR Green 1 做RT-PCR,前两天做了一次,阴性对照就批出来了,我当时以为是水,引物或者MIX中的一个被污染了,然后今天就把上面的所有的东西都换了新的,今天还是又批出阴性对照了,我实在是找不到原因了,有没有经验的高手告诉我,我还应该注意些什么.谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-3 at 15:24 ]
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
重新设计引物吧
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2008-11-15 10:23:34
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白

★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:20
kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
肯定是污染了!极可能是引物污染,重新合成吧!

你怎么知道阴性对照扩增出条带,你把反应后的样跑电泳了吗?
做有意义的事就是好好活着!
3楼2008-11-15 11:15:38
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bio-engine

银虫 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:22
可能是引物对问题,建议重新设计引物
4楼2008-11-15 16:59:04
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

一种气融胶污染
5楼2008-11-15 20:37:25
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petitella

银虫 (初入文坛)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
你做的是什么? SYBR Green这个方法本来就背景高,如果用的是TAKARA的KIT,那是背景比较高,光看Ct值确实不好辨别。排除污染问题后,建议还是看一下熔点曲线和熔点温度吧,引物熔点和目的序列的熔点是不同的。
6楼2008-11-15 21:59:43
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prettymuch


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
气溶胶污染或引物污染
7楼2008-11-21 15:22:49
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棋宴

新虫 (初入文坛)

我之前做巢式PCR,阴性对照也一直出条带
最后才发现是酶的问题
换了酶就好了
现在阴性对照就没条带了
8楼2008-11-24 22:48:54
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kd22309

金虫 (小有名气)

谢谢各位了

谢谢各位了,原因已经找到了,就是引物污染了,重新合成引物阴性就没有批出了。
9楼2008-12-04 13:39:54
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