应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 荧光定量PCR老是批出阴性对照，帮分析一下
91/1返回列表
查看: 1282  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

kd22309

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR老是批出阴性对照，帮分析一下

我最近一直用SYBR Green 1 做RT-PCR，前两天做了一次，阴性对照就批出来了，我当时以为是水，引物或者MIX中的一个被污染了，然后今天就把上面的所有的东西都换了新的，今天还是又批出阴性对照了，我实在是找不到原因了，有没有经验的高手告诉我，我还应该注意些什么.谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-3 at 15:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-11-13 20:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
重新设计引物吧
回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2008-11-15 10:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白
★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:20
kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
肯定是污染了！极可能是引物污染，重新合成吧！

你怎么知道阴性对照扩增出条带，你把反应后的样跑电泳了吗？
赞一下(6人) 回复此楼
做有意义的事就是好好活着！
3楼2008-11-15 11:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio-engine

银虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:22
可能是引物对问题，建议重新设计引物
赞一下(6人) 回复此楼
4楼2008-11-15 16:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
一种气融胶污染
回复此楼
5楼2008-11-15 20:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petitella

银虫 (初入文坛)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
你做的是什么？ SYBR Green这个方法本来就背景高，如果用的是TAKARA的KIT，那是背景比较高，光看Ct值确实不好辨别。排除污染问题后，建议还是看一下熔点曲线和熔点温度吧，引物熔点和目的序列的熔点是不同的。
赞一下(6人) 回复此楼
6楼2008-11-15 21:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prettymuch

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
气溶胶污染或引物污染
赞一下(6人) 回复此楼
7楼2008-11-21 15:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棋宴

新虫 (初入文坛)
我之前做巢式PCR，阴性对照也一直出条带
最后才发现是酶的问题
换了酶就好了
现在阴性对照就没条带了
赞一下 回复此楼
8楼2008-11-24 22:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kd22309

金虫 (小有名气)

谢谢各位了

谢谢各位了，原因已经找到了，就是引物污染了，重新合成引物阴性就没有批出了。
赞一下 回复此楼
9楼2008-12-04 13:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kd22309 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 7/350 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-05 15:25 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 15:03 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭