应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 荧光定量PCR老是批出阴性对照，帮分析一下
91/1返回列表
查看: 1085  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

kd22309

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR老是批出阴性对照，帮分析一下

我最近一直用SYBR Green 1 做RT-PCR，前两天做了一次，阴性对照就批出来了，我当时以为是水，引物或者MIX中的一个被污染了，然后今天就把上面的所有的东西都换了新的，今天还是又批出阴性对照了，我实在是找不到原因了，有没有经验的高手告诉我，我还应该注意些什么.谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-3 at 15:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-11-13 20:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
重新设计引物吧
回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2008-11-15 10:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白
★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:20
kd22309(金币+1,VIP+0): 8-21 17:38
肯定是污染了！极可能是引物污染，重新合成吧！

你怎么知道阴性对照扩增出条带，你把反应后的样跑电泳了吗？
赞一下(6人) 回复此楼
做有意义的事就是好好活着！
3楼2008-11-15 11:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio-engine

银虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:22
可能是引物对问题，建议重新设计引物
赞一下(6人) 回复此楼
4楼2008-11-15 16:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
一种气融胶污染
回复此楼
5楼2008-11-15 20:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petitella

银虫 (初入文坛)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
你做的是什么？ SYBR Green这个方法本来就背景高，如果用的是TAKARA的KIT，那是背景比较高，光看Ct值确实不好辨别。排除污染问题后，建议还是看一下熔点曲线和熔点温度吧，引物熔点和目的序列的熔点是不同的。
赞一下(6人) 回复此楼
6楼2008-11-15 21:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prettymuch

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:21
气溶胶污染或引物污染
赞一下(6人) 回复此楼
7楼2008-11-21 15:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棋宴

新虫 (初入文坛)
我之前做巢式PCR，阴性对照也一直出条带
最后才发现是酶的问题
换了酶就好了
现在阴性对照就没条带了
赞一下 回复此楼
8楼2008-11-24 22:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kd22309

金虫 (小有名气)

谢谢各位了

谢谢各位了，原因已经找到了，就是引物污染了，重新合成引物阴性就没有批出了。
赞一下 回复此楼
9楼2008-12-04 13:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kd22309 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +5 北道巷 2026-03-24 5/250 2026-03-26 20:50 by sanrepian
[考研] 303求调剂 +7 元夕元 2026-03-20 8/400 2026-03-26 20:38 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭