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皮蛋同学

新虫 (小有名气)

[求助] 量子点与DNA怎么连接?以及怎样表征? 已有1人参与

本人在做羧基修饰量子点和氨基修饰DNA的连接,看了文献有些不一样的方法,现在遇到以下问题,希望大神们指导。实验室没有师兄师姐做过量子点,时间紧迫,如能帮助,万分感激
1. 量子点与DNA连接的方法。要不要用EDC和NHS激活,连接后要不要用乙醇胺封闭没有完全结合的量子点上的羧基?以及他们的用量及反应时间。(我用的1mM的EDC和NHS,激活,10mM的乙醇胺)
2. 连接搅拌多少小时,需要4度吗
3. 如何去除未连接上的DNA。我看文献里有直接离心的,我尝试13300rpm, 30分钟离心,只离心下来很少一部分(实验室4度离心机最高转速13300)。我看还有文献是用超滤离心管的,没用过这个东西,我们实验室能离心超滤管的4度离心机,最高转速只有6000,我离心20分钟后,发现啊滤膜上的液体全部被甩下来,量子点被甩在滤膜上了,弄不下来。据做蛋白的师姐说说正常的应该是滤膜上也有液体的啊。而且滤膜上面的空间这么小,移液枪的枪头都伸不进去,怎么把上层液体弄出来呢。
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a270295049

捐助贵宾 (小有名气)

星烁纳米-量子点


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
皮蛋同学: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-08-02 17:55:18
你好,用EDC活化就行,NHS不要放,可以先投氨基DNA,然后再投EDC,孵育2h以上,最好超滤将多余DNA滤掉,你的超滤膜分子量得选对,如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以,超过的话,量子点会离心下来,如果有技术需要,随时联系我。
2楼2016-08-02 08:40:53
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下不少功夫

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有?我做的方向跟楼主一样,不过我用的是碳量子点,不是半导体量子点,而且EDC和NHS的比例是3:1,活化时间是15min,37℃摇床。主要的是,偶联DNA 的条件不太明确,多余的DNA我也没有去除, ...

我也在用碳量子点与DNA连接 现在还是什么条件都没弄明白 怎么都是连接不上 请帮忙指点一下

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7楼2017-05-16 09:44:10
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普通回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好,用EDC活化就行,NHS不要放,可以先投氨基DNA,然后再投EDC,孵育2h以上,最好超滤将多余DNA滤掉,你的超滤膜分子量得选对,如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以,超过的话,量子点会离心下来,如果有 ...

非常感谢,还有一些问题,我看文献里都有说加NHS,据说会增加稳定性?还有我看文献里都是先活化,再加DNA的啊,这个顺序有什么影响吗?
还有,我的量子点就是CdTe,选择的是10k的超滤管,头两次的离心时间久了,剩下的液面低于膜的高度,有一些量子点就粘在在膜上了,这是正常现象吗?是不是只要剩下的液面高于膜的高度,就不会出现这种情况?
3楼2016-08-02 17:59:19
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好,用EDC活化就行,NHS不要放,可以先投氨基DNA,然后再投EDC,孵育2h以上,最好超滤将多余DNA滤掉,你的超滤膜分子量得选对,如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以,超过的话,量子点会离心下来,如果有 ...

还有一个问题,EDC该加多少,文献有用1mM的,有用1mg加入到1mL Tris-Hcl的。但是这两种浓度都不好配制啊,量太小称不出来,如果配制成100X的储存液,看有的文献又说需要新鲜配制,没有新鲜配制会不会有影响?望指导
4楼2016-08-02 18:02:07
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脚滑的蛇

铜虫 (初入文坛)

请问楼主的实验有进展了没有?我做的方向跟楼主一样,不过我用的是碳量子点,不是半导体量子点,而且EDC和NHS的比例是3:1,活化时间是15min,37℃摇床。主要的是,偶联DNA 的条件不太明确,多余的DNA我也没有去除,所以测试的荧光不稳定。例如缓冲溶液和温度,用量等等,楼主是否有建议?
5楼2016-11-12 13:29:25
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有?我做的方向跟楼主一样,不过我用的是碳量子点,不是半导体量子点,而且EDC和NHS的比例是3:1,活化时间是15min,37℃摇床。主要的是,偶联DNA 的条件不太明确,多余的DNA我也没有去除, ...

时间用的半小时,常温,搅拌。多余的dna用超滤管离心

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6楼2016-11-13 02:43:52
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早日上岸

新虫 (小有名气)

请问有相关文章可以让我参考参考吗?刚开始接触,好像啥也不懂

发自小木虫Android客户端
8楼2020-06-01 15:25:02
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Sun_1083

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好,用EDC活化就行,NHS不要放,可以先投氨基DNA,然后再投EDC,孵育2h以上,最好超滤将多余DNA滤掉,你的超滤膜分子量得选对,如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以,超过的话,量子点会离心下来,如果有 ...

您好,请问DNA单链上碱基的伯胺会不会也和量子点上的羧基反应?感谢您的帮助!
9楼2020-09-05 19:26:23
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Sun_1083

新虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有?我做的方向跟楼主一样,不过我用的是碳量子点,不是半导体量子点,而且EDC和NHS的比例是3:1,活化时间是15min,37℃摇床。主要的是,偶联DNA 的条件不太明确,多余的DNA我也没有去除, ...

您好,请问DNA单链上碱基的伯胺会不会也和量子点上的羧基反应?感谢您的帮助!
10楼2020-09-05 19:26:55
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