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皮蛋同学

新虫 (小有名气)

[求助] 量子点与DNA怎么连接？以及怎样表征？ 已有1人参与

本人在做羧基修饰量子点和氨基修饰DNA的连接，看了文献有些不一样的方法，现在遇到以下问题，希望大神们指导。实验室没有师兄师姐做过量子点，时间紧迫，如能帮助，万分感激
1. 量子点与DNA连接的方法。要不要用EDC和NHS激活，连接后要不要用乙醇胺封闭没有完全结合的量子点上的羧基？以及他们的用量及反应时间。（我用的1mM的EDC和NHS，激活，10mM的乙醇胺）
2. 连接搅拌多少小时，需要4度吗
3. 如何去除未连接上的DNA。我看文献里有直接离心的，我尝试13300rpm, 30分钟离心，只离心下来很少一部分（实验室4度离心机最高转速13300）。我看还有文献是用超滤离心管的，没用过这个东西，我们实验室能离心超滤管的4度离心机，最高转速只有6000，我离心20分钟后，发现啊滤膜上的液体全部被甩下来，量子点被甩在滤膜上了，弄不下来。据做蛋白的师姐说说正常的应该是滤膜上也有液体的啊。而且滤膜上面的空间这么小，移液枪的枪头都伸不进去，怎么把上层液体弄出来呢。
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1楼 2016-08-01 10:02:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

a270295049

捐助贵宾 (小有名气)

星烁纳米-量子点

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
皮蛋同学: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-08-02 17:55:18
你好，用EDC活化就行，NHS不要放，可以先投氨基DNA，然后再投EDC，孵育2h以上，最好超滤将多余DNA滤掉，你的超滤膜分子量得选对，如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以，超过的话，量子点会离心下来，如果有技术需要，随时联系我。
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2楼2016-08-02 08:40:53
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下不少功夫

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有？我做的方向跟楼主一样，不过我用的是碳量子点，不是半导体量子点，而且EDC和NHS的比例是3:1，活化时间是15min，37℃摇床。主要的是，偶联DNA 的条件不太明确，多余的DNA我也没有去除， ...

我也在用碳量子点与DNA连接 现在还是什么条件都没弄明白 怎么都是连接不上 请帮忙指点一下

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7楼2017-05-16 09:44:10
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普通回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好，用EDC活化就行，NHS不要放，可以先投氨基DNA，然后再投EDC，孵育2h以上，最好超滤将多余DNA滤掉，你的超滤膜分子量得选对，如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以，超过的话，量子点会离心下来，如果有 ...

非常感谢，还有一些问题，我看文献里都有说加NHS，据说会增加稳定性？还有我看文献里都是先活化，再加DNA的啊，这个顺序有什么影响吗？
还有，我的量子点就是CdTe,选择的是10k的超滤管，头两次的离心时间久了，剩下的液面低于膜的高度，有一些量子点就粘在在膜上了，这是正常现象吗？是不是只要剩下的液面高于膜的高度，就不会出现这种情况？
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3楼2016-08-02 17:59:19
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好，用EDC活化就行，NHS不要放，可以先投氨基DNA，然后再投EDC，孵育2h以上，最好超滤将多余DNA滤掉，你的超滤膜分子量得选对，如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以，超过的话，量子点会离心下来，如果有 ...

还有一个问题，EDC该加多少，文献有用1mM的，有用1mg加入到1mL Tris-Hcl的。但是这两种浓度都不好配制啊，量太小称不出来，如果配制成100X的储存液，看有的文献又说需要新鲜配制，没有新鲜配制会不会有影响？望指导
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4楼2016-08-02 18:02:07
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脚滑的蛇

铜虫 (初入文坛)
请问楼主的实验有进展了没有？我做的方向跟楼主一样，不过我用的是碳量子点，不是半导体量子点，而且EDC和NHS的比例是3:1，活化时间是15min，37℃摇床。主要的是，偶联DNA 的条件不太明确，多余的DNA我也没有去除，所以测试的荧光不稳定。例如缓冲溶液和温度，用量等等，楼主是否有建议？
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5楼2016-11-12 13:29:25
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有？我做的方向跟楼主一样，不过我用的是碳量子点，不是半导体量子点，而且EDC和NHS的比例是3:1，活化时间是15min，37℃摇床。主要的是，偶联DNA 的条件不太明确，多余的DNA我也没有去除， ...

时间用的半小时，常温，搅拌。多余的dna用超滤管离心

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6楼2016-11-13 02:43:52
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早日上岸

新虫 (小有名气)
请问有相关文章可以让我参考参考吗？刚开始接触，好像啥也不懂

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8楼2020-06-01 15:25:02
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Sun_1083

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a270295049 at 2016-08-02 08:40:53
你好，用EDC活化就行，NHS不要放，可以先投氨基DNA，然后再投EDC，孵育2h以上，最好超滤将多余DNA滤掉，你的超滤膜分子量得选对，如果是CdTe量子点的话一般3KDa或者10Kda就可以，超过的话，量子点会离心下来，如果有 ...

您好，请问DNA单链上碱基的伯胺会不会也和量子点上的羧基反应？感谢您的帮助！
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9楼2020-09-05 19:26:23
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Sun_1083

新虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚滑的蛇 at 2016-11-12 13:29:25
请问楼主的实验有进展了没有？我做的方向跟楼主一样，不过我用的是碳量子点，不是半导体量子点，而且EDC和NHS的比例是3:1，活化时间是15min，37℃摇床。主要的是，偶联DNA 的条件不太明确，多余的DNA我也没有去除， ...

您好，请问DNA单链上碱基的伯胺会不会也和量子点上的羧基反应？感谢您的帮助！
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10楼2020-09-05 19:26:55
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