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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR结果总是很多位点突变怎么办？
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR结果总是很多位点突变怎么办？ 已有3人参与

如题

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1楼 2016-07-24 15:31:23
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:32:50
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:32:57
换pfu高保真

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2楼2016-07-24 15:45:49
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aliaaxmu2016 at 2016-07-24 15:45:49
换pfu高保真

pfu是哪家的酶？

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3楼2016-07-24 20:23:55
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:33:05
用高保真酶试试，PFU是高保真酶一种，各种牌子都有

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4楼2016-07-25 00:22:24
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-24 20:23:55
pfu是哪家的酶？
...

很多家都有，我们常用的国产天根的，国外Agilent的

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5楼2016-07-25 14:53:34
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
我们做过环P，6000bp没有一个突变，Agilent的

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6楼2016-07-25 14:54:46
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1564547225

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
序列太长容易错误，或者选用高保真酶。用的试剂换新的试试。PCR延伸温度再考虑考虑。
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7楼2016-07-26 09:24:42
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
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8楼2016-07-26 13:52:53
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
更换高保真酶进行扩增，如果仍出现此种现象建议直接合成片段吧
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9楼2016-07-26 15:25:05
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
如果是同义突变，那可能基因本身就是杂合的。片段多大，如果小片段，一般的酶没什么问题；如果是超过500的片段，那就得换成高保真酶了。

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10楼2016-07-27 08:54:26
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