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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR结果总是很多位点突变怎么办? 已有3人参与

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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)

★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:32:50
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:32:57
2楼2016-07-24 15:45:49
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aliaaxmu2016 at 2016-07-24 15:45:49
换pfu高保真

pfu是哪家的酶?

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3楼2016-07-24 20:23:55
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pangadmire

铁虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-25 07:33:05
用高保真酶试试,PFU是高保真酶一种,各种牌子都有

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4楼2016-07-25 00:22:24
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-24 20:23:55
pfu是哪家的酶?
...

很多家都有,我们常用的国产天根的,国外Agilent的

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5楼2016-07-25 14:53:34
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)

我们做过环P,6000bp没有一个突变,Agilent的

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6楼2016-07-25 14:54:46
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1564547225

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
序列太长容易错误,或者选用高保真酶。用的试剂换新的试试。PCR延伸温度再考虑考虑。
7楼2016-07-26 09:24:42
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匿名

用户注销 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
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8楼2016-07-26 13:52:53
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
更换高保真酶进行扩增,如果仍出现此种现象建议直接合成片段吧
9楼2016-07-26 15:25:05
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

如果是同义突变,那可能基因本身就是杂合的。片段多大,如果小片段,一般的酶没什么问题;如果是超过500的片段,那就得换成高保真酶了。

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10楼2016-07-27 08:54:26
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