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单胺氧化酶抑制剂体外筛选体系的建立问题咨询
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各位老师，你好！ 我是云南中医学院中药学研究生，我现在也正在做单胺氧化酶A抑制剂筛选体外实验，想请教老师一些问题，谢谢！ 问题一：老师，一些文章里提到测定单胺氧化酶A（MAO-A）活性的最适条件为100mmol/l,磷酸钾缓冲液（pH=7.4），在筛选这个条件时，选去了300mmol/l、250mmol/l、200mmol/l、150mmol/l、100mmol/l、50mmol/l一些浓度的磷酸钾缓冲液，请问老师300mmol/l、250mmol/l、200mmol/l的磷酸钾缓冲液（pH=7.4）是怎么配制的？我现在需要200mmol/l的磷酸钾缓冲液，但不知道怎么配制。 问题二：我查资料显示常用的磷酸盐缓冲液，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成的缓冲对,浓度为200mmol/l的有配制量表，磷酸氢二甲和磷酸二氢钾组成的缓冲对，200mmol/l浓度的没查到具体的配制量表，请问老师磷酸钠与磷酸钾缓冲液有差别吗？对测试单胺氧化酶A的实验来说，谢谢！ 问题三：老师，我查阅其他一些文献看到对测定单胺氧化酶A和单胺氧化酶B活性，磷酸盐缓冲液的最佳 pH和摩尔浓度说法不一，我感觉老师文章里提到的还是蛮有道理的，其他些文献里都没怎么细分，就说这两种酶统一 用0.2M磷酸盐缓冲液（pH=7.6)来稀释。他们所提到的磷酸晏缓冲液不知道是磷酸钠缓冲液还是磷酸钾缓冲液，有些疑惑。 问题四：老师有些文章里提到单胺氧化酶的来源是用大鼠肝脏匀浆自己提取制备的，感觉那样老师会很辛苦，不知道老师都是怎么标定蛋白含量的和怎么纯化的？最后提取的酶的活力怎么样？参考其他文献发现有人用到重组人单胺氧化酶作为酶的来源，不知道哪位老师用过这种重组蛋白酶做过实验没？不知道自己提取的和市场上买的酶是否差异性很大，是否可以用市售的来做？ 问题五：单胺氧化酶A的催化底物为5-羟色胺，而有些文献选用的是5-HT肌酸酐单水合硫酸盐，这个东西跟5-HT一样吗？文章里提到的单胺氧化酶A和单胺氧化酶B都催化特定的底物，而且有的文献提到单胺氧化酶A和单胺氧化酶B所用的底物是同一个底物（酪胺），不知道底物的选择对单胺氧化酶活性测定影响大吗？谢谢！ 谢谢各位老师，祝老师工作愉快，打扰了！ |
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