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电泳条带分析 已有1人参与
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电泳条带如下，退火梯度依次为55，56，57，58，59，60（两管一个梯度）只有59和60跑出来非常模糊。最后两管是二次pcr电泳出来的结果。目的基因应该在靠近倒数第三条带处的，不知道为什么出来的都只有在第二条那，求分析求解答。 我的模板量3ul,体系25,上下引各1ul,跑了50分钟 琼脂糖1*5%，电压90，用的是12.5ul的2*Taq master mix  @biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-07-15 19:59:14
3楼2016-07-15 20:00:46
原海亮
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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胶拍的太模糊，你为什么不把退火温度再增加试试呢，比如到65，甚至70，我是觉得你这样做一个5度的温度差，梯度的意义不大，一般pcr可以选择50到65试试，每个梯度可以相差个两三度，这样才能体现出来退火温度的影响。不知道你的循环数多少，模板是什么DNA，引物质量都会影响到 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-07-17 11:28:02