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电泳条带分析 已有1人参与
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电泳条带如下,退火梯度依次为55,56,57,58,59,60(两管一个梯度)只有59和60跑出来非常模糊。最后两管是二次pcr电泳出来的结果。目的基因应该在靠近倒数第三条带处的,不知道为什么出来的都只有在第二条那,求分析求解答。 我的模板量3ul,体系25,上下引各1ul,跑了50分钟 琼脂糖1*5%,电压90,用的是12.5ul的2*Taq master mix @biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
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原海亮
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【答案】应助回帖
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胶拍的太模糊,你为什么不把退火温度再增加试试呢,比如到65,甚至70,我是觉得你这样做一个5度的温度差,梯度的意义不大,一般pcr可以选择50到65试试,每个梯度可以相差个两三度,这样才能体现出来退火温度的影响。不知道你的循环数多少,模板是什么DNA,引物质量都会影响到 发自小木虫Android客户端 |

4楼2016-07-17 11:28:02










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