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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶的上半部分条带拖尾
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶的上半部分条带拖尾 已有6人参与

做了很多个引物发现不管哪个引物 都是胶上半部分条带变形 拖尾 下半部分是好的 不懂什么原因 希望虫友指教

胶的上半部分条带拖尾


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1楼 2016-07-15 19:16:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 四月无央 at 2016-07-15 21:24:41
是不是胶不均匀，或者电泳缓冲液的浓度低了，或者电泳时电压太高了

我用的是0.5倍的TBE 是不是浓度太低了？电压是80v

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6楼2016-07-15 22:01:22
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爱心无敌

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
1楼: Originally posted by 肉肉sr at 2016-07-15 19:16:42
做了很多个引物发现不管哪个引物 都是胶上半部分条带变形 拖尾 下半部分是好的 不懂什么原因 希望虫友指教

...

这个可能是你上下游引物加的量不一样，你可以把引物等量混合，再试试，把你得体系发给我看看。

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2楼2016-07-15 20:19:46
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱心无敌 at 2016-07-15 20:19:46
这个可能是你上下游引物加的量不一样，你可以把引物等量混合，再试试，把你得体系发给我看看。
...

我是做issr的哦 只加一端 体系是1微升模版 1微升引物 10微升mix 8微升水 谢谢哈

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3楼2016-07-15 20:34:55
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
琼脂糖加热要充分，中间适当混匀再加热，对光看没有折光的颗粒。缩短电泳时间，染料适当减少，或采用后染的方法。
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为什么
4楼2016-07-15 21:17:52
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四月无央

新虫 (小有名气)
是不是胶不均匀，或者电泳缓冲液的浓度低了，或者电泳时电压太高了

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5楼2016-07-15 21:24:41
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2016-07-15 21:17:52
琼脂糖加热要充分，中间适当混匀再加热，对光看没有折光的颗粒。缩短电泳时间，染料适当减少，或采用后染的方法。

用的是红外炉加热 看着是透明了的 就是加热过程中不知道是不是会不均匀

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7楼2016-07-15 22:02:17
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朱庆平

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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看你的Marker都变形了，应该是凝胶的问题。
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8楼2016-07-16 18:25:07
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 18:25:07
看你的Marker都变形了，应该是凝胶的问题。

加大了胶的浓度 好一些了 可是marker还是这样子呢

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9楼2016-07-17 08:40:44
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不会悲伤的鱼

新虫 (初入文坛)
你确定是拖带不是非特异性产物？

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10楼2016-07-17 09:05:56
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