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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR总是出现奇怪的拐点
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slayerjoe

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR总是出现奇怪的拐点 已有1人参与

最近在做定量PCR，结果总是有个奇怪的拐点，重复多次实验还是这样。
请问各位有头绪吗？

定量PCR总是出现奇怪的拐点
QQ截图20160712145047.png
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1楼 2016-07-12 14:56:24
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love_st

金虫 (著名写手)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
样本是什么，血液样本还是？
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2楼2016-07-12 15:09:40
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slayerjoe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2016-07-12 15:09:40
样本是什么，血液样本还是？

血清
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3楼2016-07-12 15:35:41
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love_st

金虫 (著名写手)
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★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励孩子帖交流 2016-07-13 06:10:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by slayerjoe at 2016-07-12 15:35:41
血清

不知道你做的探针法的还是染料法的，感觉上核酸不纯，有抑制，你的加样量是不是很大
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4楼2016-07-12 15:43:50
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slayerjoe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by love_st at 2016-07-12 15:43:50
不知道你做的探针法的还是染料法的，感觉上核酸不纯，有抑制，你的加样量是不是很大...

探针法的，50μL的体系，加样量是20μL。
磁珠法提取的样品，纯度确实不太好。
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5楼2016-07-12 16:14:09
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love_st

金虫 (著名写手)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by slayerjoe at 2016-07-12 16:14:09
探针法的，50μL的体系，加样量是20μL。
磁珠法提取的样品，纯度确实不太好。...

你这个是不是做的诊断试剂盒，加样量20ul大部分体系都会是你这个样子
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6楼2016-07-12 16:19:55
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slayerjoe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by love_st at 2016-07-12 16:19:55
你这个是不是做的诊断试剂盒，加样量20ul大部分体系都会是你这个样子...

是的，那我是不是应该减少上样量再试试？
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7楼2016-07-12 16:23:57
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许彦

木虫 (正式写手)
结果分析的问题，你把基线设置改为自动分析或者3-8。

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8楼2016-07-13 05:21:42
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许彦

木虫 (正式写手)
还有你这个机器是slan的吗

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9楼2016-07-13 05:22:43
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-14 09:02:18
引用回帖:
7楼: Originally posted by slayerjoe at 2016-07-12 16:23:57
是的，那我是不是应该减少上样量再试试？...

如果你做的是HBV HCV HIV之类的话，国家有要求，上样量必须20ul。5ul上样量绝对会好很多。
加样量20ul，非常考验你的提取纯度和PCR体系，所谓调整基线设置根本不能改变你的结果
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10楼2016-07-13 08:33:51
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