[交流] 流感病毒RNA，反转录 已有2人参与

菜鸟我生物本科学历，今年6月初开始的测定流感病毒HA，NA的序列工作。因之前专门到做此试验的专业部门去学习过，试剂盒都按学习时采购的。我们的大概流程是：病毒总RNA的提取，反转录，cDNA扩增（PCR），电泳鉴定。。。。。。为什么至写到这里，因为只做到这，就遇到问题，无法向下开展了。 问题： 总的问题：没有得到目的条带（HA：1700bp，NA：1400bp） 提取RNA是用试剂盒提取的，有三条亮带，前两条比较亮。 反转录PCR扩增后，得到的片段多为250bp左右的小片段，没得到1700bp啊~ 多次调整退火温度，甚至更换新的引物（学习时，相同毒种可以P出来的引物），都没有得到目的条带。菜鸟我实在分析不出原因~求助大神予以指导啊~~~ 此外，菜鸟还有些问题求助大神们： 问题1：学习时测序所用流感毒种取自于鸡胚尿囊液，现在所测毒种为细胞培养增值的流感病毒，二者在RNA提取的过程中是否应有所不同？ 问题2：≤250bp甚至＜100bp片段的出现大多由什么原因引起？引物二聚体？还是引物特异性不好呢？还是有别的什么原因? 请各位大神不吝指导，拜托了！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

• Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析 已经有0人回复
• Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析 已经有0人回复
• 化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有70人回复
• NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析 已经有0人回复
• DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析 已经有0人回复
• 科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点 已经有0人回复
• SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂 已经有0人回复
• 氢氧化钾活化操作 已经有18人回复
• 散金 已经有67人回复
• 生物质超级电容器 已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

高级回复