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songyl1414

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母基因删除

最近在做酵母基因片段删除,方法是两步转化,先用URA3,代替要被被删除的部分;SC-URA3平板筛远。再将要删除片段的前后两段基因经搭桥PCR连在一起,用它转化去掉URA3,经5-FOA筛选后,PCR检测,电泳正常情况是出现一条条带,但出现了两条,一条正确,一条表示URA3未被删除。请问有人知道这是怎么回事吗?急求。

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luckydog52

木虫 (著名写手)

pcr检测不应该是四对引物扩增检测吗? 你只用一对?

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自信源于一次次成功的积累
2楼2016-07-09 10:33:08
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songyl1414

新虫 (初入文坛)

我是用了一对,来检测URA3是否去除。理想情况是去除URA3,条带大小700多一点。但出现两条带。没有做过用四对引物来扩增检测,它的原理是什么呀。。

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3楼2016-07-09 12:50:55
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大摇大摆

铜虫 (小有名气)

你好,想请问你你的5-FOA的培养基是怎么配的呢?最近在做酿酒酵母ura3基因敲除,正常菌种在配制的5-foa的培养基都能生长,感觉有点问题,想请教你一下
我用双手成就你的梦想
4楼2017-06-26 08:31:04
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匿名

用户注销 (正式写手)

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5楼2017-12-27 13:29:59
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seeeea

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liujianyu at 2017-12-27 13:29:59
请教一下 你的5-FOA后来怎么配的 我现在用水配真的很难溶解啊...

你好 请问 你的5-FOA加入培养基后有调ph吗
6楼2018-01-10 16:11:01
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