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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr 已有2人参与

我做连接转化以后，挑单克隆进行pcr，目的片段1500左右，四个单克隆中三个正常，另一个只有500bp，而且仅一个条带，是什么原因？那个500bp的东西是什么？我用的T5载体。
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1楼 2016-07-08 14:36:58
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-09 08:03:32
看你用的引物是什么了，如果是载体上的通用引物，直接看你出发载体的图谱就可能知道空载的产物大小，如果是特异性引物，这个咋带可能是菌体内基因或者污染造成的，当然并不影响接下来的实验进行，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-07-08 17:31:05
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
没连好呗，不过不影响你的实验

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3楼2016-07-09 01:23:37
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以测序看看，得出结果了再来这说说。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2016-07-09 08:10:06
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sinky熹

铜虫 (初入文坛)
有正常的不就好了嘛

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5楼2016-07-09 08:35:19
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长
你想的太多了

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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
6楼2016-07-09 13:43:29
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-07-08 17:31:05
看你用的引物是什么了，如果是载体上的通用引物，直接看你出发载体的图谱就可能知道空载的产物大小，如果是特异性引物，这个咋带可能是菌体内基因或者污染造成的，当然并不影响接下来的实验进行，祝好！
...

用的M13通用引物，空载的话应该是150bp,但是条带只有500bp。
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7楼2016-07-09 20:42:48
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leland2

新虫 (正式写手)
选正确克隆即可~有一个对，就不白费功夫了

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8楼2016-07-11 20:55:03
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