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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr 已有2人参与

我做连接转化以后,挑单克隆进行pcr,目的片段1500左右,四个单克隆中三个正常,另一个只有500bp,而且仅一个条带,是什么原因?那个500bp的东西是什么?我用的T5载体。
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-09 08:03:32
看你用的引物是什么了,如果是载体上的通用引物,直接看你出发载体的图谱就可能知道空载的产物大小,如果是特异性引物,这个咋带可能是菌体内基因或者污染造成的,当然并不影响接下来的实验进行,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-07-08 17:31:05
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

没连好呗,不过不影响你的实验

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3楼2016-07-09 01:23:37
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以测序看看,得出结果了再来这说说。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2016-07-09 08:10:06
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sinky熹

铜虫 (初入文坛)

5楼2016-07-09 08:35:19
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长

耻与众草之为伍,何亭亭而独芳!何不为人之所赏兮,深山穷谷委严霜。
6楼2016-07-09 13:43:29
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-07-08 17:31:05
看你用的引物是什么了,如果是载体上的通用引物,直接看你出发载体的图谱就可能知道空载的产物大小,如果是特异性引物,这个咋带可能是菌体内基因或者污染造成的,当然并不影响接下来的实验进行,祝好!
...

用的M13通用引物,空载的话应该是150bp,但是条带只有500bp。
7楼2016-07-09 20:42:48
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leland2

新虫 (正式写手)

选正确克隆即可~有一个对,就不白费功夫了

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8楼2016-07-11 20:55:03
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