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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于pUC18连接问题
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开小猫

木虫 (正式写手)

[求助] 关于pUC18连接问题 已有1人参与

最近做分子实验，用pUC18质粒连接两个片段，然后转DH5α，但是在转化时，得到的总是空载体，求助大神在实验过程中是否还要注意哪些方面。已经做了三次，一次没有转出来，两次转化成功，但都是空载体。希望有大神指点一下，非常感谢！！！
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1楼 2016-07-07 20:24:56
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-08 07:48:58
开小猫: 金币+20, ★有帮助 2016-07-09 19:17:32
你的两个片段，是来源于PCR吗？可能酶切效果不好，导致连接不上。另外，你做阳性对照了吗？
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2楼2016-07-07 21:17:38
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开小猫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-07-07 21:17:38
你的两个片段，是来源于PCR吗？可能酶切效果不好，导致连接不上。另外，你做阳性对照了吗？

是pcr产物胶回收后酶切。之前做过一次没有转出来，感觉至少载体应该切开了，后来用同样的载体连接，转出来都是空载体。所以觉得很奇怪。请问阳性对照是指转化的时候做吗？
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3楼2016-07-09 14:59:39
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