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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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开小猫

木虫 (正式写手)

[求助] 关于pUC18连接问题 已有1人参与

最近做分子实验,用pUC18质粒连接两个片段,然后转DH5α,但是在转化时,得到的总是空载体,求助大神在实验过程中是否还要注意哪些方面。已经做了三次,一次没有转出来,两次转化成功,但都是空载体。希望有大神指点一下,非常感谢!!!
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-08 07:48:58
开小猫: 金币+20, 有帮助 2016-07-09 19:17:32
你的两个片段,是来源于PCR吗?可能酶切效果不好,导致连接不上。另外,你做阳性对照了吗?
2楼2016-07-07 21:17:38
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开小猫

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-07-07 21:17:38
你的两个片段,是来源于PCR吗?可能酶切效果不好,导致连接不上。另外,你做阳性对照了吗?

是pcr产物胶回收后酶切。之前做过一次没有转出来,感觉至少载体应该切开了,后来用同样的载体连接,转出来都是空载体。所以觉得很奇怪。请问阳性对照是指转化的时候做吗?
3楼2016-07-09 14:59:39
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