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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 非变性凝胶电泳
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
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10楼: Originally posted by 高蕾蕾1234 at 2016-07-21 20:19:08
我做出来的蛋白质在浓缩胶和分离胶的界面有很清晰的条带，我以为是浓度的问题，可是我更换浓度再进行实验的时候，发现都没有条带。不知道是怎么回事。在跑SDS-PAGE时，是有条带的，真是不知道是怎么回事。愁死我了...

你是SDS-PAGE有条带，非变形没有条带，都在孔的位置么？我记得不是很清楚了，非变性胶与SDS明显的区别就是带电性不同，SDS屏蔽了电荷。非变形胶带有电荷，因此你的这种情况你查一下你的蛋白PI，我记得酸性和碱性的跑的方向不同，你要做相应的调整。
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
11楼2016-07-22 10:49:08
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高蕾蕾1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2016-07-22 10:49:08
你是SDS-PAGE有条带，非变形没有条带，都在孔的位置么？我记得不是很清楚了，非变性胶与SDS明显的区别就是带电性不同，SDS屏蔽了电荷。非变形胶带有电荷，因此你的这种情况你查一下你的蛋白PI，我记得酸性和碱性的 ...

我的蛋白PI是在3左右，属于酸性蛋白质，所以我留意了一下，网上说酸性蛋白质的跑胶顺序和方向是和SDS一样的，所以出现上述情况很是不解。
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12楼2016-07-31 14:50:00
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枝山征明

铁虫 (小有名气)
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送红花一朵
能给一下非变形蛋白电泳的详细步骤吗？实验小白，求大神赐教
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13楼2016-09-27 10:33:07
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rego_wang

新虫 (小有名气)
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你的非变性电泳跑出来了么？
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14楼2016-10-08 18:25:16
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ninxia1

禁虫 (著名写手)
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15楼2016-11-07 10:11:26
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sungel

银虫 (初入文坛)
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要用专用的marker，另外，如果蛋白构象不均一，很容易出现弥散或者模糊条带，普通marker跑不出条带也很正常

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16楼2016-11-07 12:33:50
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sungel

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ninxia1 at 2016-11-07 10:11:26
想问下非变性蛋白电泳试剂里加不加SDS啊   巯基乙醇不加这个知道   还有maker是不是要买专门跑非变性蛋白电泳的啊
...

loading和sds page以及缓冲液中都不加sds和巯基乙醇

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17楼2016-11-07 12:35:17
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ninxia1

禁虫 (著名写手)
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18楼2016-11-07 13:17:17
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ninxia1

禁虫 (著名写手)
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19楼2016-11-07 13:20:04
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sungel

银虫 (初入文坛)
是的

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20楼2016-11-07 16:50:23
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