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陈伯阳

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法步骤以及配比

有哪位大神知道DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法步骤以及配比?
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masterboyama

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-03 22:30:06
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-07-04 07:25:21
陈伯阳: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-07-04 09:03:35
胶是29:1.电泳液是1*tae。固定液里12分钟,400毫升乙醇,100毫升百分之十的冰醋酸,加水1升。银染是千分之二的销酸银,2克每升,银染12分钟。显色是15克氢氧化钠加1升水,10毫升甲醛,显色5-8分钟。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-03 20:50:35
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陈伯阳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by masterboyama at 2016-07-03 20:50:35
胶是29:1.电泳液是1*tae。固定液里12分钟,400毫升乙醇,100毫升百分之十的冰醋酸,加水1升。银染是千分之二的销酸银,2克每升,银染12分钟。显色是15克氢氧化钠加1升水,10毫升甲醛,显色5-8分钟。
...

谢谢,帮助~
3楼2016-07-04 09:05:34
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陈伯阳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by masterboyama at 2016-07-03 20:50:35
胶是29:1.电泳液是1*tae。固定液里12分钟,400毫升乙醇,100毫升百分之十的冰醋酸,加水1升。银染是千分之二的销酸银,2克每升,银染12分钟。显色是15克氢氧化钠加1升水,10毫升甲醛,显色5-8分钟。
...

再问一句,你是做什么的?是SSR吗?
4楼2016-07-04 09:09:51
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masterboyama

铁虫 (著名写手)

以前做过ssr.百度一下有好多这方面的文章资料

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5楼2016-07-04 13:37:59
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memorize1991

木虫 (正式写手)

我做非变性胶多,96孔,8%胶,电泳液是0.5×TBE或者1×TBE,电泳时间是1500V跑1.5小时。取出胶块后双纯水清洗一下,3g硝酸银,2L水染色5分钟(一般我用7次到8次就换新的),取出后双纯水清洗2到3次,每次大概30秒,然后在氢氧化钠溶液中显色(2L双纯水,30g氢氧化钠,一般用温水配,显色时间一般就2分钟不到就出来,具体看条带显色情况)

发自小木虫Android客户端
6楼2016-07-05 18:49:46
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wzt1417

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by masterboyama at 2016-07-03 20:50:35
胶是29:1.电泳液是1*tae。固定液里12分钟,400毫升乙醇,100毫升百分之十的冰醋酸,加水1升。银染是千分之二的销酸银,2克每升,银染12分钟。显色是15克氢氧化钠加1升水,10毫升甲醛,显色5-8分钟。
...

改善一下,降低背景色会更好些

发自小木虫Android客户端
7楼2016-07-06 00:17:55
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田晨霖

新虫 (初入文坛)

银染液配置:AgNO3            3ml
                 冰乙酸            10ml
                95%酒精          20ml
                 蒸馏水           1500ml
充分振荡摇匀。将大板放入其中避光银染10min,不可以银染太久,否则脱胶。
银染后大板取出用蒸馏水涮洗一下,显影
显影液配置:NaOH            30g   
                   甲醛             6ml   
                   蒸馏水          1500ml  
充分振荡均匀,将银染好的大板在显影液中充分显影,显影后在水中洗去碱味。
在发光板中观测DNA条带,拍照。我研究生时是这么做的,效果还不错
8楼2016-07-22 14:02:20
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