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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌落PCR得到了我预期大小的条带，为啥测序是空载体？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 菌落PCR得到了我预期大小的条带，为啥测序是空载体？ 已有2人参与

而不符合我预期大小的条带居然测出来了

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1楼 2016-06-28 12:29:00
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sayen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-29 07:43:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-06-28 23:37:42
为啥呀
...

你在挑菌落的时候可能沾有未连接上的片段，而挑的菌落本身是空载，所以鉴定要用一个载体上的引物，一个片段上的引物

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7楼2016-06-28 23:49:34
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普通回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
顶

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2楼2016-06-28 12:43:53
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好做下酶切鉴定。
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3楼2016-06-28 21:02:37
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-28 21:02:37
最好做下酶切鉴定。

木有酶切位点

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4楼2016-06-28 22:23:41
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sayen

银虫 (小有名气)
鉴定引物如果是插入片段的上下游的话，会有pcr假阳性

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5楼2016-06-28 23:21:02
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sayen at 2016-06-28 23:21:02
鉴定引物如果是插入片段的上下游的话，会有pcr假阳性

为啥呀

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6楼2016-06-28 23:37:42
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sayen at 2016-06-28 23:49:34
你在挑菌落的时候可能沾有未连接上的片段，而挑的菌落本身是空载，所以鉴定要用一个载体上的引物，一个片段上的引物
...

这样啊，那载体上的引物需要在什么位置设计呢

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8楼2016-06-28 23:51:18
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zfy535251

新虫 (小有名气)
我也遇到了同样的问题

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9楼2016-06-30 16:18:43
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zfy535251 at 2016-06-30 16:18:43
我也遇到了同样的问题

╮(╯▽╰)╭

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10楼2016-06-30 17:45:42
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