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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于SDS-PAGE电泳，跑完胶以后银染的问题
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都没有77

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳，跑完胶以后银染的问题 已有2人参与

求助：小硕一枚，一不小心走上了生物化学结合的不归路，现在有点走不下去了，求指点！！图中泳道除了第一个是Marker，其余全是纯的加完DTT的1倍上样液，不含蛋白，但是染出来在66kD的地方还是有齐整的二条细带,照理说纯的1*B跑出来的带应该是干净的。换过银染用的所有试剂，还是有，只有不加DTT时候没有66kD处的杂带的。求指点

关于SDS-PAGE电泳，跑完胶以后银染的问题
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1楼 2016-06-28 09:54:34
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DTT被蛋白污染了？换个新的DTT试试。
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
2楼2016-06-28 17:25:09
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都没有77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by keke226 at 2016-06-28 17:25:09
DTT被蛋白污染了？换个新的DTT试试。

换过新买的DTT，还是那样。试过买来的商品化的5倍上样液，也有自己配的1倍上样液，还有Marker里自带的1倍上样液，都是那样
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3楼2016-06-28 17:47:14
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 都没有77 at 2016-06-28 17:47:14
换过新买的DTT，还是那样。试过买来的商品化的5倍上样液，也有自己配的1倍上样液，还有Marker里自带的1倍上样液，都是那样...

每次跑电泳的内槽液是不是新的？
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
4楼2016-06-28 19:45:56
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都没有77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by keke226 at 2016-06-28 19:45:56
每次跑电泳的内槽液是不是新的？...

是的，配好的5倍甘氨酸缓冲液，每次取出适量稀释，用完一次就扔了
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5楼2016-06-28 20:57:20
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 都没有77 at 2016-06-28 20:57:20
是的，配好的5倍甘氨酸缓冲液，每次取出适量稀释，用完一次就扔了...

母液会不会长菌了？用粉末新配些再试试吧。
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
6楼2016-06-28 21:35:26
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都没有77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by keke226 at 2016-06-28 21:35:26
母液会不会长菌了？用粉末新配些再试试吧。...

恩，没准有可能。因为该换的都换过了，明天试试换甘氨酸缓冲液。忘了说了，谢谢~~明天有结果了再回复你
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7楼2016-06-28 22:48:24
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都没有77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by keke226 at 2016-06-28 21:35:26
母液会不会长菌了？用粉末新配些再试试吧。...

换过新的缓冲液，还是出现了之前的条带，肿么办
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8楼2016-06-29 22:23:17
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
都没有77: 金币+5, ★有帮助, 虽然问题还没解决，但是真的很感谢热心帮助 2016-06-30 16:25:45
会不会你们的电泳器皿或者点样枪头有污染，会不会有什么东西被DTT降解了。
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9楼2016-06-30 09:49:44
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都没有77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by chlorella409 at 2016-06-30 09:49:44
会不会你们的电泳器皿或者点样枪头有污染，会不会有什么东西被DTT降解了。

不同浓度的胶跑出来都有，而且位置和BSA相仿，求解啊
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10楼2016-06-30 11:51:56
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