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求助：关于Brdu免疫荧光染色！！有效期至08年11月14日
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我想通过BrdU结合FITC对细胞进行免疫荧光染色，同时用DAPI染细胞核，从而检测细胞增殖。实验前细胞先用含10ug/ml BrdU的培养基，37度培养2小时，然后进行染色处理，实验步骤如下： 1.Wash plates with PBS 3x. 2.Fix them in 4%PFA, 20 min at RT. 3.Wash them in PBS 3x. 4.0.5% Triton X-100 in PBS, 20min at 4℃ 5.Wash slides in PBS 3x. 6.2N HCL( in Distilled water) 30min at 37℃( DNA denaturation). 7.Wash in PBS 5x 8.Incubate slides with 1%BSA in PBS at RT for 30min. 9.Rabbit anti-BrdU diluted to 1:250 with 1%BSA in PBS, incubate at 4℃ for 14-16hrs. 10.Wash with PBS 3x. 11.1: 100 dilution of FITC conjugated goat anti rabbit IgG 1%BSA in PBS, incubate at RT for 1 hr. 12.Wash in PBS 3x 13.Incubate with 500ng/ml DAPI for 8 min to stain nuclei. 14.Wash in PBS 3x. 15.Mount with 50% glycerol in PBS. 实验已经重复很多遍了，DAPI染细胞核染得很好，FITC确总也染不上。我以前从来没做过免疫染色，不知道问题出在哪，还请专家帮忙解答，我就快疯了…… [ Last edited by magic8502 on 2008-11-7 at 17:34 ] |
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