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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 点突变检测出现三峰，求大神指导！
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ynotshhhhh

新虫 (初入文坛)

[求助] 点突变检测出现三峰，求大神指导！ 已有1人参与

以cDNA为模板进行pcr并测序，有一目标位点，野生型为C,突变型为G,但是检测中发现，在部分野生纯合型样本中显示为C/A,在部分突变纯合型样本中显示为G/A,在部分杂合体中显示为C/G/A(即出现三峰)，但是所有样本中(1000个)在该位点均未出现A/A基因型,造成这种情况的原因可能是什么？

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-06-27 21:13:08
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江边鸟

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-28 07:40:07
看峰图具体是什么样子的，是否可信。有时候测序不好存在背景峰低峰干扰亦或者测序信号值偏高都会影响底峰。

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2楼2016-06-27 22:21:21
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ynotshhhhh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2016-06-27 22:21:21
看峰图具体是什么样子的，是否可信。有时候测序不好存在背景峰低峰干扰亦或者测序信号值偏高都会影响底峰。

峰图显示测序结果没有背景噪音干扰，图一为野生型（502位点），图二为杂合（503位点），图三为突变型（502位点）。类似图三峰图的pcr产物也单克隆测序过，的确存在G和A两种情况。个人觉得测序应该没什么问题。
点突变检测出现三峰，求大神指导！


点突变检测出现三峰，求大神指导！-1


点突变检测出现三峰，求大神指导！-2



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3楼2016-06-27 23:26:05
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象牙白

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

三个突变体都存在？
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小元，加油！
4楼2016-07-13 22:30:25
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ynotshhhhh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 象牙白 at 2016-07-13 22:30:25
三个突变体都存在？

是的，那个三峰的也克隆检测过，的确有三种

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5楼2016-07-16 21:18:01
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