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gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 换载后,GFP就不表达了 已有5人参与

先构建pEGFP-A(A是我克隆的基因),含重组子的DH5a有绿色荧光。
然后再换载,把A-GFP切下来克隆到另一个载体上,测序无误,但是TOP10没有荧光。
换载前是有荧光的,应该不是移码突变。
求解。
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kaobo2012

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因,不适合在这个载体上表达。
2楼2016-06-26 22:02:27
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-27 07:42:13
绿色荧光蛋白貌似是单体,你后面融合的那个蛋白,可能对其结构有影响,导致绿色荧光蛋白不能发出荧光,你跑蛋白电泳,应该有目标条带吧?

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-06-27 00:19:53
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-26 22:02:27
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因,不适合在这个载体上表达。

那请问你是怎么解决的呢?换载体?
4楼2016-06-27 13:40:11
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-27 00:19:53
绿色荧光蛋白貌似是单体,你后面融合的那个蛋白,可能对其结构有影响,导致绿色荧光蛋白不能发出荧光,你跑蛋白电泳,应该有目标条带吧?

我还没有跑蛋白,目的蛋白是融合在GFP前面的。在换载之前还有荧光,说明我的目的蛋白对GFP的表达没有影响吧。
5楼2016-06-27 13:42:32
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你先跑蛋白电泳看看呗,你换个载体之后,启动子就不一样了,如果蛋白电泳结果正确,那就是换载体之后,结构变了

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-06-27 13:55:53
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

换什么载体了,
7楼2016-06-27 15:44:08
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by viki_MDK at 2016-06-27 15:44:08
换什么载体了,

不是载体的问题,移码突变了。。。
就是你刚刚回复的另一个帖子
8楼2016-06-27 16:24:33
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aofeng860308

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是开始把目的基因放在gfp的后面,后来是目的基因在gfp后面吗?

发自小木虫IOS客户端
9楼2016-06-27 16:30:21
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by aofeng860308 at 2016-06-27 16:30:21
你是开始把目的基因放在gfp的后面,后来是目的基因在gfp后面吗?

没有,目的基因融合在gfp前面的
现在确定是移码突变了,可是换载前是有荧光反应的,奇怪了。。
如果可以的话,能看一下这个帖子吗http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10438190
10楼2016-06-27 16:38:39
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