应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 换载后，GFP就不表达了
111/2返回列表12下一页
查看: 1897  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 换载后，GFP就不表达了 已有5人参与

先构建pEGFP-A（A是我克隆的基因），含重组子的DH5a有绿色荧光。
然后再换载，把A-GFP切下来克隆到另一个载体上，测序无误，但是TOP10没有荧光。
换载前是有荧光的，应该不是移码突变。
求解。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-06-26 19:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因，不适合在这个载体上表达。
赞一下 回复此楼
2楼2016-06-26 22:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-27 07:42:13
绿色荧光蛋白貌似是单体，你后面融合的那个蛋白，可能对其结构有影响，导致绿色荧光蛋白不能发出荧光，你跑蛋白电泳，应该有目标条带吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-06-27 00:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-26 22:02:27
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因，不适合在这个载体上表达。

那请问你是怎么解决的呢？换载体？
赞一下 回复此楼
4楼2016-06-27 13:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-27 00:19:53
绿色荧光蛋白貌似是单体，你后面融合的那个蛋白，可能对其结构有影响，导致绿色荧光蛋白不能发出荧光，你跑蛋白电泳，应该有目标条带吧？

我还没有跑蛋白，目的蛋白是融合在GFP前面的。在换载之前还有荧光，说明我的目的蛋白对GFP的表达没有影响吧。
赞一下 回复此楼
5楼2016-06-27 13:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你先跑蛋白电泳看看呗，你换个载体之后，启动子就不一样了，如果蛋白电泳结果正确，那就是换载体之后，结构变了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-27 13:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)
换什么载体了，
回复此楼
7楼2016-06-27 15:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by viki_MDK at 2016-06-27 15:44:08
换什么载体了，

不是载体的问题，移码突变了。。。
就是你刚刚回复的另一个帖子
赞一下 回复此楼
8楼2016-06-27 16:24:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是开始把目的基因放在gfp的后面，后来是目的基因在gfp后面吗？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-06-27 16:30:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by aofeng860308 at 2016-06-27 16:30:21
你是开始把目的基因放在gfp的后面，后来是目的基因在gfp后面吗？

没有，目的基因融合在gfp前面的
现在确定是移码突变了，可是换载前是有荧光反应的，奇怪了。。
如果可以的话，能看一下这个帖子吗http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10438190
赞一下 回复此楼
10楼2016-06-27 16:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gstracy 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭