应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 换载后，GFP就不表达了
111/2返回列表12下一页
查看: 2164  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 换载后，GFP就不表达了 已有5人参与

先构建pEGFP-A（A是我克隆的基因），含重组子的DH5a有绿色荧光。
然后再换载，把A-GFP切下来克隆到另一个载体上，测序无误，但是TOP10没有荧光。
换载前是有荧光的，应该不是移码突变。
求解。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-06-26 19:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因，不适合在这个载体上表达。
赞一下 回复此楼
2楼2016-06-26 22:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-27 07:42:13
绿色荧光蛋白貌似是单体，你后面融合的那个蛋白，可能对其结构有影响，导致绿色荧光蛋白不能发出荧光，你跑蛋白电泳，应该有目标条带吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-06-27 00:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-26 22:02:27
我也遇到类似的问题。应该是你这个基因，不适合在这个载体上表达。

那请问你是怎么解决的呢？换载体？
赞一下 回复此楼
4楼2016-06-27 13:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-27 00:19:53
绿色荧光蛋白貌似是单体，你后面融合的那个蛋白，可能对其结构有影响，导致绿色荧光蛋白不能发出荧光，你跑蛋白电泳，应该有目标条带吧？

我还没有跑蛋白，目的蛋白是融合在GFP前面的。在换载之前还有荧光，说明我的目的蛋白对GFP的表达没有影响吧。
赞一下 回复此楼
5楼2016-06-27 13:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你先跑蛋白电泳看看呗，你换个载体之后，启动子就不一样了，如果蛋白电泳结果正确，那就是换载体之后，结构变了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-27 13:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)
换什么载体了，
回复此楼
7楼2016-06-27 15:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by viki_MDK at 2016-06-27 15:44:08
换什么载体了，

不是载体的问题，移码突变了。。。
就是你刚刚回复的另一个帖子
赞一下 回复此楼
8楼2016-06-27 16:24:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是开始把目的基因放在gfp的后面，后来是目的基因在gfp后面吗？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-06-27 16:30:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by aofeng860308 at 2016-06-27 16:30:21
你是开始把目的基因放在gfp的后面，后来是目的基因在gfp后面吗？

没有，目的基因融合在gfp前面的
现在确定是移码突变了，可是换载前是有荧光反应的，奇怪了。。
如果可以的话，能看一下这个帖子吗http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10438190
赞一下 回复此楼
10楼2016-06-27 16:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gstracy 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭