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pet-32a做原核表达，空质粒转化DH5a一直无阳性克隆出现，求原因 已有4人参与
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借的pet-32a质粒载体，浓度为34微克每毫升，因为浓度较低，需要先用空质粒转化DH5a,摇菌后大提，用浓度高的质粒载体做酶切连接。 但是，空质粒转DH5a涂板（氨苄抗性）,第二天总是筛选不到阳性菌落。楼主试着从以下分析原因： 1.感受态细胞问题，因为感受态细胞是自己做的，心里十分没底，但是用诺维赞的DH5a.也不出现阳性菌落 2.载体存放时间过久浓度降低。 3、个人操作问题，楼主感觉都是按着标准操作程序走的，怎么就不出结果呢？ 各位同仁有遇到相似情况没，望指点一二，不胜感激 |
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aofeng860308
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