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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pet-32a做原核表达，空质粒转化DH5a一直无阳性克隆出现，求原因
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啄木鸟HXH

新虫 (初入文坛)

[求助] pet-32a做原核表达，空质粒转化DH5a一直无阳性克隆出现，求原因 已有4人参与

借的pet-32a质粒载体，浓度为34微克每毫升，因为浓度较低，需要先用空质粒转化DH5a,摇菌后大提，用浓度高的质粒载体做酶切连接。
但是，空质粒转DH5a涂板（氨苄抗性）,第二天总是筛选不到阳性菌落。楼主试着从以下分析原因：
1.感受态细胞问题，因为感受态细胞是自己做的，心里十分没底，但是用诺维赞的DH5a.也不出现阳性菌落
2.载体存放时间过久浓度降低。
3、个人操作问题，楼主感觉都是按着标准操作程序走的，怎么就不出结果呢？
各位同仁有遇到相似情况没，望指点一二，不胜感激
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1楼 2016-06-26 00:17:13
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
1.感受态原因

发自小木虫IOS客户端
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9楼2016-06-27 16:19:32
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-06-26 06:43:06
操作的可能性比较大，载体的浓度不算太小。
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2楼2016-06-26 01:12:20
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ttszero

新虫 (小有名气)
实在不行，直接从公司买不行么？这种常用载体也不算贵啊……空载

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3楼2016-06-26 01:12:25
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ttszero

新虫 (小有名气)
空载很好转dh5a的，虽然浓度还行，跑个gel看看plasmid状态比测浓度好

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-06-26 01:14:25
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