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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot需要检测的5种蛋白全部集中在35—-63KD之间已有3人参与

请教各位大神,western blot我需要检测的5种蛋白全部集中在35—-63KD之间,最小的只相差3KD,该怎么办?要每次电泳只能检测一种蛋白吗?
还有内参可以选择什么蛋白比较合适?谢谢!
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

内参最好与目的蛋白相差5kd以上。同时检测多个蛋白,最好也要相差大一些。样品多的话,多跑几次,样品不够,可以用一抗二抗去除液除去之前孵育的抗体,再孵新的一抗二抗,但针对不同的蛋白,去除液的孵育条件可能要摸索,另外或多或少也会去除一些目的条带,如果目的条带丰度低的话,就不建议用了

发自小木虫IOS客户端
9楼2016-06-28 08:31:14
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by lynn111666 at 2016-06-28 20:17:15
请问一抗二抗去除液如何配?...

有好多种,网上可以查到一些配方,酸性、中性、碱性,也可以购买商品化的试剂

发自小木虫IOS客户端
12楼2016-06-29 09:17:50
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