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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot需要检测的5种蛋白全部集中在35—-63KD之间 已有3人参与

请教各位大神,western blot我需要检测的5种蛋白全部集中在35—-63KD之间,最小的只相差3KD,该怎么办?要每次电泳只能检测一种蛋白吗?
还有内参可以选择什么蛋白比较合适?谢谢!
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

内参最好与目的蛋白相差5kd以上。同时检测多个蛋白,最好也要相差大一些。样品多的话,多跑几次,样品不够,可以用一抗二抗去除液除去之前孵育的抗体,再孵新的一抗二抗,但针对不同的蛋白,去除液的孵育条件可能要摸索,另外或多或少也会去除一些目的条带,如果目的条带丰度低的话,就不建议用了

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9楼2016-06-28 08:31:14
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林子来了

新虫 (初入文坛)

我曾问过一个实验室,他们是先一个蛋白曝光,然后用原膜再敷一抗,不过我没试过,不知道行不行

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2楼2016-06-25 23:58:52
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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 林子来了 at 2016-06-25 23:58:52
我曾问过一个实验室,他们是先一个蛋白曝光,然后用原膜再敷一抗,不过我没试过,不知道行不行

之前,已经曝光过的不用洗掉吗?
3楼2016-06-26 12:01:26
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林子来了

新虫 (初入文坛)

洗掉干嘛,只要你要的蛋白还在就可以啦

发自小木虫Android客户端
4楼2016-06-26 12:38:51
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by lynn111666 at 2016-06-26 12:01:26
之前,已经曝光过的不用洗掉吗?...

需要把之前结合的一抗洗掉,当然洗脱后再加新的一抗,信号可能会变弱,最好的还是一张膜检测一个蛋白
5楼2016-06-27 07:43:40
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star013

新虫 (知名作家)


我们公司可以提供蛋白技术服务

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6楼2016-06-27 10:13:36
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)

可以洗掉,再用封闭液封闭,之后再敷一抗敷二抗都可以的。不过效果肯定不如新的膜好

发自小木虫Android客户端
7楼2016-06-27 16:33:57
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舟之行

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用一抗二抗洗褪液体洗掉,然后从封闭开始做
仿制药一致性评价,多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
8楼2016-06-27 19:08:20
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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 舟之行 at 2016-06-27 19:08:20
用一抗二抗洗褪液体洗掉,然后从封闭开始做

洗脱液如何配置,或者有商业化的吗?效果如何?
10楼2016-06-28 20:15:44
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