24小时热门版块排行榜    

查看: 1868  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tw1123581321

金虫 (小有名气)

[求助] DH5a发酵罐表达 已有1人参与

用DH5a表达一个蛋白,原始用2yt,然后换了半合成培养基:甘油,蛋白胨,酵母粉,磷酸盐,硫酸镁,微量元素等,在摇瓶水平上表达优于2yt
目前做发酵罐,底料同摇瓶,补料培养基:甘油,蛋白胨,酵母粉等。
具体流程:37度接种培养保持DO大于20,至DO大于80后,按μ0.2的速度指数流加6小时,1mMIPTG诱导,同时流加速度变为μ0.05,37度表达4小时,干重仅为15,表达量仅为摇瓶水平的1/3-1/4
请教
1怎样提高表达量?
2DH5a一般能做到多大密度?用什么样的流加方式?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123

感觉诱导时间太晚了,可以适当的提前,发酵罐和摇瓶培养的区别很大,一般在发酵罐上培养的话诱导点和最终的OD有一点的关系,还有发酵罐上长的速度比较快,建议补料中的抗生素浓度和基础培养基的浓度一致。
12楼2016-07-05 09:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123

引用回帖:
13楼: Originally posted by tw1123581321 at 2016-07-05 14:03:19
那诱导之后需要补料吗?需要调整补料速度吗?
...

诱导之后要不要补料就要根据你们的工艺需求了,诱导之后的补料速度尽量要慢点,避免快速生长造成质粒丢失,影响产量
14楼2016-07-05 14:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tw1123581321 的主题更新
信息提示
请填处理意见