应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫沉淀试验操作
71/1返回列表
查看: 1260  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiafeijiafei

金虫 (小有名气)

[求助] 免疫沉淀试验操作 已有1人参与

大家好，我最近在做IP实验，想纯化目的蛋白，分子量是57KD。但是因为是新手，不是太懂。有几个问题想咨询：
1、抗体的选择：抗体的效价高低对抗原抗体的结合效率有影响吗？还是只单纯考虑抗体的浓度？
2、因为我是要把目的蛋白洗脱下来做液质分析，师兄师姐说我这个蛋白会和抗体的重链分不开，想知道目的蛋白和抗体对质谱分析有影响吗？一定要用交联剂？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-06-21 21:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiafeijiafei(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2016-06-22 20:16:10
1.免疫沉淀实验用的抗体，一般要看亲和力。亲和力太高，不利于洗脱。亲和力太弱，不利于目的蛋白的收集。如果你是买的抗体，就看看说明书，说可以做这个实验，那用就可以了。
2.你质谱，要打完整分子量，还是氨基酸序列？这个要讲清楚，才能回答你的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2016-06-21 22:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-21 22:02:36
1.免疫沉淀实验用的抗体，一般要看亲和力。亲和力太高，不利于洗脱。亲和力太弱，不利于目的蛋白的收集。如果你是买的抗体，就看看说明书，说可以做这个实验，那用就可以了。
2.你质谱，要打完整分子量，还是氨基酸 ...

打氨基酸序列，主要是想看翻译后修饰

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-06-21 23:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocherry

铁虫 (正式写手)
选择不同的抗体，可避免和抗体链重合

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-06-22 18:13:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biocherry at 2016-06-22 18:13:36
选择不同的抗体，可避免和抗体链重合

可是抗体分重链和轻链，重链是55kd，洗脱的话不就重合了么？工程师说可以用交联剂，把抗体交联到磁珠上，这样洗脱的时候抗体就不会和抗原同时洗脱下来。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-06-22 18:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiafeijiafei at 2016-06-21 23:59:19
打氨基酸序列，主要是想看翻译后修饰
...

质谱我做的少，不过，我印象当中，要先打完整分子量，从理论上判断有没有修饰（比如糖链的长度，可以算出来的），打氨基酸序列，是要酶解的，如果找到合适的酶，这样就可以确定翻译修饰的具体位点。
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-22 21:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-22 21:01:16
质谱我做的少，不过，我印象当中，要先打完整分子量，从理论上判断有没有修饰（比如糖链的长度，可以算出来的），打氨基酸序列，是要酶解的，如果找到合适的酶，这样就可以确定翻译修饰的具体位点。...

对，我现在就是想把蛋白纯化出来，经过酶解等操作把多肽进液质，分析该蛋白有哪些翻译后修饰。后面的操作我都会，现在的问题就是纯化做IP，觉得难做

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-06-22 21:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiafeijiafei 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +8 Mr. Z 2026-03-25 8/400 2026-03-25 23:00 by peike
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭