24小时热门版块排行榜    

查看: 1910  |  回复: 9

raopian

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因植物检测如何排除农杆菌干扰,或者提供其他思路~~

是这样的,转基因的抗性植物提取DNA后,但是由于农杆菌没有脱干净,基因组DNA中可能是带质粒DNA的,用通用引物PCR检测的时候,所有的样本DNA都能P到目的条带,所以就没办法检测了。我试过做切胶回收了,但是没有什么分离效果,所有的DNA依然能够P出产物~~so,有大神能够提供一点方法去分开农杆菌干扰么,除去质粒DNA,或者其他的检测方法之类的~~~对了,我的载体没有荧光蛋白或者GUS。。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M1182

版主 (文坛精英)

聪聪家族

优秀版主

这个问题不好说,也有可能是你引物的问题。你的阳性对照和阴性对照都有吗?
2楼2016-06-21 22:05:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raopian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by M1182 at 2016-06-21 22:05:48
这个问题不好说,也有可能是你引物的问题。你的阳性对照和阴性对照都有吗?

做了阴性对照,没有,,阳性的木有做~~引物没有问题应该,前面所用的菌检测的时候都正常~~~
3楼2016-06-23 18:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

你干嘛纠结这个问题,后面不是还有RNA和蛋白可以检测吗?

发自小木虫Android客户端
4楼2016-06-23 20:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raopian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-06-23 20:10:33
你干嘛纠结这个问题,后面不是还有RNA和蛋白可以检测吗?

并没有,我做删除~~只能说对靶点测序,但是这样的话每个样本都要克隆测序了~~~先用通用方法可以筛一遍~~而且载体转进去了也不一定靶点有变化~~所以要先确定是不是转进去了
5楼2016-06-24 09:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by raopian at 2016-06-24 09:23:18
并没有,我做删除~~只能说对靶点测序,但是这样的话每个样本都要克隆测序了~~~先用通用方法可以筛一遍~~而且载体转进去了也不一定靶点有变化~~所以要先确定是不是转进去了...

那你在转化前,植株对抗性的敏感度测试做了吗,如果很敏感,一般有抗性的基本都转进去了,假的很少或者没有

发自小木虫Android客户端
6楼2016-06-24 09:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raopian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-06-24 09:30:29
那你在转化前,植株对抗性的敏感度测试做了吗,如果很敏感,一般有抗性的基本都转进去了,假的很少或者没有
...

杨树,对抗性不是很敏感好像,潮霉素的话浓度3-4就死了,放到2的话能长芽,但是芽生根只能用1的浓度~~依师兄师姐的说法,基本上十株检测出一株,转化效率没有那么高好像~~~
7楼2016-06-24 14:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你太善良

新虫 (著名写手)

提rna,用cDNA跑呗,或者DNA northern杂交

发自小木虫Android客户端
8楼2016-06-24 16:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞凤

新虫 (初入文坛)

楼主能不能说一下杨树转基因应该注意那些啊
9楼2017-06-20 23:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raopian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞凤 at 2017-06-20 23:36:23
楼主能不能说一下杨树转基因应该注意那些啊

亲也是做这个?我已经不做了~~~~
10楼2017-10-24 18:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 raopian 的主题更新
信息提示
请填处理意见