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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » Q柱不挂柱
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匿名

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1楼2016-06-21 15:03:33
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 再点一根烟 at 2016-06-22 14:16:40
多谢。你的意思是蛋白不挂柱的原因可能是样品盐离子浓度高于平衡液的盐离子浓度了？一般是样品盐浓度低于平衡液盐浓度么？...

不是这个意思，是平衡的过程理论平衡液是不加盐，后来洗脱加盐其实就是加的盐形成的离子电荷与吸附的蛋白竞争柱上的静电位，将蛋白从柱子上洗脱下来。为了避免非特异吸附才给平衡液加低浓度盐。

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6楼2016-06-22 14:35:16
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
再点一根烟: 金币+5 2016-06-22 16:45:36
上样液及平衡液的离子强度太高。离子交换上样缓冲液离子强度要很低。先脱盐，在过离子交换。或者先过离子交换的，在过GST。祝顺利。
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2楼2016-06-22 10:41:20
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匿名

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3楼2016-06-22 14:16:40
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你平衡液里面先不要加盐，如果有非特异性吸附，要为了避免非特异性吸附，可以适量加点10~20mM的盐。平衡液里盐浓度大蛋白吸附不上去，就相当于洗脱了。因为洗脱液与平衡液的区别就在于平衡液加了2M的盐。Q的使用推荐缓冲也如下：平衡液（淋洗液）0.05M Tris ,PH8.3;洗脱液0.05M Tris+2M Nacl PH8.3。注意样品预处理后，上样前充分平衡，平衡液（淋洗液）和洗脱液PH和电导要一致。

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4楼2016-06-22 14:25:44
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