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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做的定点突变PCR，可跑的带总是成这样，凝集在点样孔是怎么回事
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-25 19:00:50
体系怎么配的？酶和模板都加了多少？

楼主已成功解决，在楼下分享一下经验。

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11楼2016-07-08 09:15:02
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 少文329 at 2016-07-01 10:39:40
我也是同样得问题，我的质粒16Kb

楼主成功解决，楼下分享一下经验。

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12楼2016-07-08 09:15:40
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
做的定点突变PCR，可跑的带总是成这样，凝集在点样孔是怎么回事

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13楼2016-07-08 09:19:35
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:19:35

我用的takara的Primerstar酶，体系是50ulul。跑了很多次，都出现点样孔凝集，高条带扩散的现象，模板是试剂盒提取的质粒，4.5kbp的大小。这是我的体系，第二栏的0.2X是我把模板稀释了5倍后跑的一个体系，跑出来结果比1X好点，用0.2X体系跑出来后消化转化提质粒送测序发现突变点成功改回来，PCR的结果其实就是这样，目的条带不多不亮但确实有，可能还有扩增条件的问题不佳等。中间泳道就是0.2X，左右是没有稀释的。
做的定点突变PCR，可跑的带总是成这样，凝集在点样孔是怎么回事-1



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14楼2016-07-08 09:26:11
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少文329

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:15:40
楼主成功解决，楼下分享一下经验。
...

楼主能否说一下具体是哪个酶，引物浓度是多少，还有模板用量，谢谢了！顺便能不能说一下引物设计原则，万谢！！！

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15楼2016-07-08 11:28:32
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少文329

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:11:52
楼主已成功解决，不是点错的低级错误。
...

楼主可否分享一下经验，我的一直还是这种情况啊，拜托了！！！
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16楼2016-08-08 15:58:27
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子不知

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:11:52
楼主已成功解决，不是点错的低级错误。
...

求教，是哪里出现了问题，怎么解决的呢？
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17楼2017-06-20 16:11:44
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zai4109

新虫 (正式写手)
我做过点突变

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18楼2019-05-31 01:11:43
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫
引用回帖:
10楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:11:52
楼主已成功解决，不是点错的低级错误。
...

怎么解决了
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19楼2019-06-04 18:57:44
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