做的定点突变PCR，可跑的带总是成这样，凝集在点样孔是怎么回事 - 分子生物 - PCR相关

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7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-25 19:00:50
体系怎么配的？酶和模板都加了多少？

楼主已成功解决，在楼下分享一下经验。

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11楼2016-07-08 09:15:02

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8楼: Originally posted by 少文329 at 2016-07-01 10:39:40
我也是同样得问题，我的质粒16Kb

楼主成功解决，楼下分享一下经验。

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12楼2016-07-08 09:15:40

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13楼2016-07-08 09:19:35

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13楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:19:35

我用的takara的Primerstar酶，体系是50ulul。跑了很多次，都出现点样孔凝集，高条带扩散的现象，模板是试剂盒提取的质粒，4.5kbp的大小。这是我的体系，第二栏的0.2X是我把模板稀释了5倍后跑的一个体系，跑出来结果比1X好点，用0.2X体系跑出来后消化转化提质粒送测序发现突变点成功改回来，PCR的结果其实就是这样，目的条带不多不亮但确实有，可能还有扩增条件的问题不佳等。中间泳道就是0.2X，左右是没有稀释的。