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kaoyanjiu

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[交流] 做的定点突变PCR，可跑的带总是成这样，凝集在点样孔是怎么回事已有8人参与

我的模板是重组后的质粒，做的定点突变PCR，可跑出来总是这样，点样孔凝集，而且还拖尾。

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1楼2016-06-20 18:37:58

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kaoyanjiu

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引用回帖:

13楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2016-07-08 09:19:35

我用的takara的Primerstar酶，体系是50ulul。跑了很多次，都出现点样孔凝集，高条带扩散的现象，模板是试剂盒提取的质粒，4.5kbp的大小。这是我的体系，第二栏的0.2X是我把模板稀释了5倍后跑的一个体系，跑出来结果比1X好点，用0.2X体系跑出来后消化转化提质粒送测序发现突变点成功改回来，PCR的结果其实就是这样，目的条带不多不亮但确实有，可能还有扩增条件的问题不佳等。中间泳道就是0.2X，左右是没有稀释的。