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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 连载体菌p相关问题
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华音流韶

新虫 (初入文坛)

[求助] 连载体菌p相关问题 已有1人参与

在做三个基因的克隆，一起做的，第一个基因摇菌完做菌p出来的条带总是载体序列，但是第二个和第三个是正确的，这是载体自连吗？已经两次了。
附图，最左边是dl2000maker，然后每九个孔是一个基因，中间空一格

连载体菌p相关问题


@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-06-20 00:48:38
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-06-20 07:38:24
xn8008: 应助指数+1 2016-06-20 07:59:53
1) 你怎么确定是载体自连？没有测序光看大小不能说明问题
2) 用什么引物做的PCR，一般用克隆引物来做，这样有条带就是连入（除去污染情况），无就是没有。
3) 用通用引物也行，但基本都会P出条带，调与你连入大小相似的菌株提质粒、酶切再鉴定。
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华音流韶
Let God do with it as He wills
2楼2016-06-20 05:22:03
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华音流韶

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 05:22:03
1) 你怎么确定是载体自连？没有测序光看大小不能说明问题
2) 用什么引物做的PCR，一般用克隆引物来做，这样有条带就是连入（除去污染情况），无就是没有。
3) 用通用引物也行，但基本都会P出条带，调与你连入大小 ...

测序过了，测出来的结果在Ncbi上比对就是pmd19t载体序列，引物就是根据序列设计的普通引物啊，关键这三个基因是一起做的，就第一个有问题，其他两个都测出来了……

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3楼2016-06-20 10:01:24
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 华音流韶 at 2016-06-20 10:01:24
测序过了，测出来的结果在Ncbi上比对就是pmd19t载体序列，引物就是根据序列设计的普通引物啊，关键这三个基因是一起做的，就第一个有问题，其他两个都测出来了……
...

全部用载体上的通用引物来检测，比如说M13。最好不要用基因引物。然后根据大小来选择测序

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华音流韶
4楼2016-06-20 10:09:56
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华音流韶

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-06-20 10:09:56
全部用载体上的通用引物来检测，比如说M13。最好不要用基因引物。然后根据大小来选择测序
...

我试试，谢谢噢

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5楼2016-06-20 10:23:47
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