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华音流韶

新虫 (初入文坛)

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[求助] 连载体菌p相关问题已有1人参与

在做三个基因的克隆，一起做的，第一个基因摇菌完做菌p出来的条带总是载体序列，但是第二个和第三个是正确的，这是载体自连吗？已经两次了。
附图，最左边是dl2000maker，然后每九个孔是一个基因，中间空一格

@biostar2009 @飞约疯人院发自小木虫IOS客户端

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1楼 2016-06-20 00:48:38

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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆不喜欢发脾气

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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xn8008: 应助指数+1 2016-06-20 07:59:53

1) 你怎么确定是载体自连？没有测序光看大小不能说明问题
2) 用什么引物做的PCR，一般用克隆引物来做，这样有条带就是连入（除去污染情况），无就是没有。
3) 用通用引物也行，但基本都会P出条带，调与你连入大小相似的菌株提质粒、酶切再鉴定。

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华音流韶

Let God do with it as He wills

2楼2016-06-20 05:22:03

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华音流韶

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2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 05:22:03
1) 你怎么确定是载体自连？没有测序光看大小不能说明问题
2) 用什么引物做的PCR，一般用克隆引物来做，这样有条带就是连入（除去污染情况），无就是没有。
3) 用通用引物也行，但基本都会P出条带，调与你连入大小 ...

测序过了，测出来的结果在Ncbi上比对就是pmd19t载体序列，引物就是根据序列设计的普通引物啊，关键这三个基因是一起做的，就第一个有问题，其他两个都测出来了……

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3楼2016-06-20 10:01:24

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