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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 可以同时将2个目的片段克隆到同一载体的同一位点吗？
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gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 可以同时将2个目的片段克隆到同一载体的同一位点吗？ 已有5人参与

载体可用的酶切位点只有HindIII单酶切位点，需要将两个基因串联起来克隆到该位点，那是否可以在两个基因相对的一端都设计HindIII，在相邻的一端设计其他相同的酶切位点，然后让两个目的片段和载体在同一个连接体系中连接。这样是否可行呢？
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1楼 2016-06-18 15:33:34
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
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不太理解，感觉正反都可以啊……如果非要酶切连接，建议买支磷酸酶。

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9楼2016-06-20 14:46:56
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:02:18
先在别的克隆载体克隆，片段之间用别的位点连接，另外的分别一个HIndIII，或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。
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为什么
2楼2016-06-18 15:43:49
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2016-06-18 15:43:49
先在别的克隆载体克隆，片段之间用别的位点连接，另外的分别一个HIndIII，或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。

两个片段加起来有4kb，GC含量不低，无缝克隆可能不太行吧
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3楼2016-06-18 16:22:26
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上所说无缝可行，楼主的方案怎么控制正反？

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4楼2016-06-19 16:18:34
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