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gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 可以同时将2个目的片段克隆到同一载体的同一位点吗? 已有5人参与

载体可用的酶切位点只有HindIII单酶切位点,需要将两个基因串联起来克隆到该位点,那是否可以在两个基因相对的一端都设计HindIII,在相邻的一端设计其他相同的酶切位点,然后让两个目的片段和载体在同一个连接体系中连接。这样是否可行呢?
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2016-06-18 15:43:49
先在别的克隆载体克隆,片段之间用别的位点连接,另外的分别一个HIndIII,或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。

两个片段加起来有4kb,GC含量不低,无缝克隆可能不太行吧
3楼2016-06-18 16:22:26
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547star

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:02:18
先在别的克隆载体克隆,片段之间用别的位点连接,另外的分别一个HIndIII,或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。
为什么
2楼2016-06-18 15:43:49
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼上所说无缝可行,楼主的方案怎么控制正反?

发自小木虫Android客户端
4楼2016-06-19 16:18:34
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
无缝可隆还是很强大的,个人感觉要比酶切连接的方式靠谱

发自小木虫Android客户端
5楼2016-06-19 22:32:56
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by junior850621 at 2016-06-19 16:18:34
楼上所说无缝可行,楼主的方案怎么控制正反?

gene1的上游和gene2的下游都设计Hind3,gene1的下游和gene2的上游都设计EcoRI,这样应该不会颠倒吧。
6楼2016-06-20 14:37:18
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-06-19 22:32:56
无缝可隆还是很强大的,个人感觉要比酶切连接的方式靠谱

可是4kb比较难扩增吧
7楼2016-06-20 14:39:00
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不是说两个片段加起来4k吗?那每个必然小于四k啊。

发自小木虫Android客户端
8楼2016-06-20 14:44:27
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太理解,感觉正反都可以啊……如果非要酶切连接,建议买支磷酸酶。

发自小木虫Android客户端
9楼2016-06-20 14:46:56
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gstracy at 2016-06-20 14:39:00
可是4kb比较难扩增吧...

4k不难吧!

发自小木虫Android客户端
10楼2016-06-20 15:44:58
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