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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 可以同时将2个目的片段克隆到同一载体的同一位点吗？
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gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 可以同时将2个目的片段克隆到同一载体的同一位点吗？ 已有5人参与

载体可用的酶切位点只有HindIII单酶切位点，需要将两个基因串联起来克隆到该位点，那是否可以在两个基因相对的一端都设计HindIII，在相邻的一端设计其他相同的酶切位点，然后让两个目的片段和载体在同一个连接体系中连接。这样是否可行呢？
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1楼 2016-06-18 15:33:34
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2016-06-18 15:43:49
先在别的克隆载体克隆，片段之间用别的位点连接，另外的分别一个HIndIII，或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。

两个片段加起来有4kb，GC含量不低，无缝克隆可能不太行吧
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3楼2016-06-18 16:22:26
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547star

木虫 (著名写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:02:18
先在别的克隆载体克隆，片段之间用别的位点连接，另外的分别一个HIndIII，或者无缝克隆或者CPEC应该都可以。
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为什么
2楼2016-06-18 15:43:49
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
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楼上所说无缝可行，楼主的方案怎么控制正反？

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4楼2016-06-19 16:18:34
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
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无缝可隆还是很强大的，个人感觉要比酶切连接的方式靠谱

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5楼2016-06-19 22:32:56
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junior850621 at 2016-06-19 16:18:34
楼上所说无缝可行，楼主的方案怎么控制正反？

gene1的上游和gene2的下游都设计Hind3，gene1的下游和gene2的上游都设计EcoRI，这样应该不会颠倒吧。
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6楼2016-06-20 14:37:18
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-06-19 22:32:56
无缝可隆还是很强大的，个人感觉要比酶切连接的方式靠谱

可是4kb比较难扩增吧
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7楼2016-06-20 14:39:00
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
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不是说两个片段加起来4k吗？那每个必然小于四k啊。

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8楼2016-06-20 14:44:27
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
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不太理解，感觉正反都可以啊……如果非要酶切连接，建议买支磷酸酶。

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9楼2016-06-20 14:46:56
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gstracy at 2016-06-20 14:39:00
可是4kb比较难扩增吧...

4k不难吧！

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10楼2016-06-20 15:44:58
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