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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提土壤DNA条带弱
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张小蛋

新虫 (小有名气)

[求助] 提土壤DNA条带弱

之前提取的都很好，三月份的时候提取的，条带超粗，超亮，最近六月份提取同样的方法怎么也达不到原来的浓度，方法25g土壤，12.5mlEDTA,20水，5mlTris-Hcl,12.5mlSDS,20ml酚氯仿异戊醇混匀冰上放置3min,离心8000r.10min
取上清+0.6体积异丙醇，冰上静置30min,离心8000r/10min
弃上清，留沉淀，用400微升洗脱液溶解离心，取上清
试剂盒纯化
图片是近期提取的，条带很弱，而且下部有拖带，不知道什么原因，土样取自学校富含腐殖质的土壤

提土壤DNA条带弱


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-06-15 17:14:03
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖 2016-06-15 21:17:35
嘿嘿，提取试剂是新配的吗，土样是取上层2-3厘米的表层土吗，从图上看总dna提的质量还不错啊

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2楼2016-06-15 19:59:30
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-15 19:59:30
嘿嘿，提取试剂是新配的吗，土样是取上层2-3厘米的表层土吗，从图上看总dna提的质量还不错啊

太少了，以前提的带都特别粗~是新试剂

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4楼2016-06-16 08:32:02
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-06-16 08:32:48
我们实验室一向都是能不花钱就不花~我也没办法~
...

能不花钱就不花钱，跟我们实验室一样。。。。。

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8楼2016-06-16 23:19:30
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普通回帖

werq63

金虫 (著名写手)
直接用乙醇或者异丙醇沉淀而不是试剂盒呢？

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3楼2016-06-15 22:31:05
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by werq63 at 2016-06-15 22:31:05
直接用乙醇或者异丙醇沉淀而不是试剂盒呢？

我们实验室一向都是能不花钱就不花~我也没办法~

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5楼2016-06-16 08:32:48
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-15 19:59:30
嘿嘿，提取试剂是新配的吗，土样是取上层2-3厘米的表层土吗，从图上看总dna提的质量还不错啊

取的是表层土，之前提没有什么问题啊~

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6楼2016-06-16 08:33:51
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 感谢有意义的回答 2016-06-17 06:59:17
提取量少一般可能是研磨不彻底，研磨时间长点，把细沙都磨碎。还有就是沉淀量太少，可能之前室温低，现在室温高，所以同样时间沉淀量不一样。

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7楼2016-06-16 14:04:11
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-16 14:04:11
提取量少一般可能是研磨不彻底，研磨时间长点，把细沙都磨碎。还有就是沉淀量太少，可能之前室温低，现在室温高，所以同样时间沉淀量不一样。

谢谢~我试试~

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9楼2016-06-17 07:20:29
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wenhuoyeying at 2016-06-16 23:19:30
能不花钱就不花钱，跟我们实验室一样。。。。。
...

哈哈哈~毕竟花的不是自己的钱~

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10楼2016-06-17 07:21:02
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