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张小蛋

新虫 (小有名气)

[求助] 提土壤DNA条带弱

之前提取的都很好,三月份的时候提取的,条带超粗,超亮,最近六月份提取同样的方法怎么也达不到原来的浓度,方法25g土壤,12.5mlEDTA,20水,5mlTris-Hcl,12.5mlSDS,20ml酚氯仿异戊醇混匀冰上放置3min,离心8000r.10min
取上清+0.6体积异丙醇,冰上静置30min,离心8000r/10min
弃上清,留沉淀,用400微升洗脱液溶解离心,取上清
试剂盒纯化
图片是近期提取的,条带很弱,而且下部有拖带,不知道什么原因,土样取自学校富含腐殖质的土壤

提土壤DNA条带弱


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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张小蛋

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-15 19:59:30
嘿嘿,提取试剂是新配的吗,土样是取上层2-3厘米的表层土吗,从图上看总dna提的质量还不错啊

太少了,以前提的带都特别粗~是新试剂

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4楼2016-06-16 08:32:02
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张小蛋

新虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by werq63 at 2016-06-15 22:31:05
直接用乙醇或者异丙醇沉淀而不是试剂盒呢?

我们实验室一向都是能不花钱就不花~我也没办法~

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5楼2016-06-16 08:32:48
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张小蛋

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-15 19:59:30
嘿嘿,提取试剂是新配的吗,土样是取上层2-3厘米的表层土吗,从图上看总dna提的质量还不错啊

取的是表层土,之前提没有什么问题啊~

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6楼2016-06-16 08:33:51
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张小蛋

新虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-16 14:04:11
提取量少一般可能是研磨不彻底,研磨时间长点,把细沙都磨碎。还有就是沉淀量太少,可能之前室温低,现在室温高,所以同样时间沉淀量不一样。

谢谢~我试试~

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9楼2016-06-17 07:20:29
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张小蛋

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wenhuoyeying at 2016-06-16 23:19:30
能不花钱就不花钱,跟我们实验室一样。。。。。
...

哈哈哈~毕竟花的不是自己的钱~

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10楼2016-06-17 07:21:02
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张小蛋

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引用回帖:
12楼: Originally posted by wenhuoyeying at 2016-06-17 13:20:18
我也是提dna的
...

嗯嗯,我们老师倒也没那么抠,哈哈哈~

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13楼2016-06-17 17:51:50
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张小蛋

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 默默zm at 2016-06-18 07:21:13
我提的dna拖尾也严重,是什么原因

可能是降解了~天气太热了~全程保持低温~

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16楼2016-06-18 07:49:08
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