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哈利波特2000

新虫 (正式写手)

[求助] 硫酸铵沉淀法提酶问题 已有3人参与

有哪位同胞做过硫酸铵沉淀法提酶啊,我现在是做的黑曲霉降解农药,在三角瓶中培养两周,农药被降解了,可是我却提不出酶来,按理论上说黑曲霉可以产生好多酶的,为什么我都提不出来。还有硫酸铵方法可以用磁力搅拌吗,还是必须用玻璃棒搅拌呢?希望做过的好心人给点建议啊,十分感谢

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乘风浮云

新虫 (正式写手)

2楼2016-06-13 23:19:09
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


你的酶搞不好是胞内酶,你弄上清液肯定不行

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3楼2016-06-13 23:31:38
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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有些酶在液体表达不多,或者不分泌。换成固体培养看看,或者可能在细胞内,可用研磨管研磨破碎后在提取看看。
为什么
4楼2016-06-14 00:33:18
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哈利波特2000

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 乘风浮云 at 2016-06-13 23:19:09
先说说你是怎么提的吧

培养液过滤,将黑曲霉去掉,用上清液直接加硫酸铵搅拌,冰浴,直到硫酸铵饱和,大概70%,这个时候应该有沉淀产生吧,可是我们的没有沉淀。

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5楼2016-06-14 07:39:56
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
中性盐沉淀过程,初始浓度也重要,温度要控制(最好预冷),沉淀相出现也需要时间。
祝顺利,
6楼2016-06-14 16:23:51
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乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 哈利波特2000 at 2016-06-14 07:39:56
培养液过滤,将黑曲霉去掉,用上清液直接加硫酸铵搅拌,冰浴,直到硫酸铵饱和,大概70%,这个时候应该有沉淀产生吧,可是我们的没有沉淀。
...

首先确定你的酶是包内还是包外的,包外的如果直接上清没有沉淀,可以浓缩下上清再进行硫酸胺沉淀!包内的你就要菌体破碎再盐淅了

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7楼2016-06-15 21:44:44
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