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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 硫酸铵沉淀法提酶问题
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哈利波特2000

新虫 (正式写手)

[求助] 硫酸铵沉淀法提酶问题 已有3人参与

有哪位同胞做过硫酸铵沉淀法提酶啊，我现在是做的黑曲霉降解农药，在三角瓶中培养两周，农药被降解了，可是我却提不出酶来，按理论上说黑曲霉可以产生好多酶的，为什么我都提不出来。还有硫酸铵方法可以用磁力搅拌吗，还是必须用玻璃棒搅拌呢？希望做过的好心人给点建议啊，十分感谢

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1楼 2016-06-13 22:50:13
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乘风浮云

新虫 (正式写手)
先说说你是怎么提的吧

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2楼2016-06-13 23:19:09
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
你的酶搞不好是胞内酶，你弄上清液肯定不行

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3楼2016-06-13 23:31:38
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些酶在液体表达不多，或者不分泌。换成固体培养看看，或者可能在细胞内，可用研磨管研磨破碎后在提取看看。
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为什么
4楼2016-06-14 00:33:18
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哈利波特2000

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乘风浮云 at 2016-06-13 23:19:09
先说说你是怎么提的吧

培养液过滤，将黑曲霉去掉，用上清液直接加硫酸铵搅拌，冰浴，直到硫酸铵饱和，大概70%，这个时候应该有沉淀产生吧，可是我们的没有沉淀。

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5楼2016-06-14 07:39:56
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
中性盐沉淀过程，初始浓度也重要，温度要控制（最好预冷），沉淀相出现也需要时间。
祝顺利，
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6楼2016-06-14 16:23:51
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乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 哈利波特2000 at 2016-06-14 07:39:56
培养液过滤，将黑曲霉去掉，用上清液直接加硫酸铵搅拌，冰浴，直到硫酸铵饱和，大概70%，这个时候应该有沉淀产生吧，可是我们的没有沉淀。
...

首先确定你的酶是包内还是包外的，包外的如果直接上清没有沉淀，可以浓缩下上清再进行硫酸胺沉淀！包内的你就要菌体破碎再盐淅了

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7楼2016-06-15 21:44:44
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