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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教酶的微胶囊制备中遇到的问题 已有1人参与

有水溶性蛋白酶,最适PH值在3左右,在PH6,7,8条件下无酶活。现想将该蛋白做成微胶囊,改变其最适PH值,使微胶囊在中性条件下能够有部分酶活。具体操作步骤如下:首先用SPAN 80乳化液体石蜡,将(蛋白酶与海藻酸钠的混合液)缓慢加入液体石蜡中,搅拌1小时后,然后加入氯化钙水溶液固化微球。离心后弃去上层石蜡,下层水相中有白色沉淀,沉淀用水清洗3遍。显微镜下观察该沉淀为透明小球,将沉淀重悬后,检测酶活。
结果如图所示,最适PH值基本无变化,而且在中心条件下基本无酶活。
请问:1.微胶囊的最适PH值未发生变化是否和微球的大小有直接关系?2.是否有其他方法能使该酶在中性条件下保持部分酶活?
新手上路,希望大家多给意见!非常感谢!!!

请教酶的微胶囊制备中遇到的问题
图片1.jpg
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397407233

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【答案】应助回帖

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yaiqi-87: 金币+20, 有帮助 2016-06-13 08:17:46
有以下几点意见供参考:1,微胶囊化只是给物质构建一个微观的环境,这个环境可能与周围的大环境有所不同,并不能改变物质固有的属性。您的实验中,酶的最高活性对应的pH值,不会因为微胶囊化而改变。
2,对您的试验思路,我的理解是这样的,微胶囊内部的pH应该是3,微胶囊外部的pH是6、7或者8.这样的话,您最开始配制酶溶液时就应该设定好pH值。
3,如果第2条的理解是对的,这样做的难度也是非常的大。因为你要体现出酶活性,胶囊壁就需要有一定的透性,反应物要能够进出微胶囊才行;反应物能够进出,势必水分子和其他影响pH的盐类等也会进出,这样微胶囊内外部的pH就会趋近于变成一样,酶的活性也就失去了。
4,如果第3条的理解是对的,或许好好调整微胶囊内外的渗透压会有点帮助。
2楼2016-06-12 22:07:02
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 397407233 at 2016-06-12 22:07:02
有以下几点意见供参考:1,微胶囊化只是给物质构建一个微观的环境,这个环境可能与周围的大环境有所不同,并不能改变物质固有的属性。您的实验中,酶的最高活性对应的pH值,不会因为微胶囊化而改变。
2,对您的试验 ...

1.参考过其他文献,文献中报道的关于蛋白酶的微胶囊后,其最适PH值会偏移1~2个PH单位
2.裸酶溶液是中性的,只不过是在不同PH值的反应底物溶液中反应,然后根据反应液中底物的消耗量来计算的酶活力,结果如上图所示,同样的包裹后的酶的酶活也是这么计算的
3.裸酶消耗底物后生成甲酸,,在囊化的微环境中应该是偏酸性的,而与外环境中的缓冲液交换的话,我认为投入的反应液的PH值必须要偏中性,这样反应出来的最适PH值就会发生变化了。
谢谢您的回答
3楼2016-06-13 08:30:04
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