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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 新人跪求双荧光素酶报告基因结果分析
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dengsilong

捐助贵宾 (初入文坛)

[求助] 新人跪求双荧光素酶报告基因结果分析 已有4人参与

最近刚做了双荧光素酶报告基因检测，结果很怪，双阳性组的荧光值明显比其它三组小很多(小3-10倍)，但海肾/萤火虫比值却很乱，没有一致的显著差异，跪求有经验的前辈帮我分析一下，这实验重复过两次了，之前也是这种现象，谢谢各位前辈了！

下面是我的检测结果，行为复孔，列为组别，数据为萤火虫/海肾，上表为原始数据，下表为比例值(海肾/萤火虫比例值)：

W-NC            18977/7207    16354/5558    18115/6571    18668/4417    19597/5203

W-miR           5499/1176      6886/1527       6773/1499      5150/1141      6153/1303

m1-NC         61454/11552   50625/8434     44676/8417    45236/9003    31294/5429

m1-miR        27912/6779     14634/4175     15290/3105   14509/4739     13403/3830

W-空白        36480/11301    32176/9439      26145/7979


W-NC    0.38    0.34    0.36    0.27    0.27

W-miR   0.21    0.22   0.22    0.22    0.21

m1-NC   0.19    0.17    0.19    0.20    0.17

m1-miR  0.24    0.29    0.20    0.33    0.29

W-空白   0.31    0.29    0.31


之前做过两次，大致情况相当，不知道为什么会这样，这算是阴性结果吗？可是为什么每次双阳性组荧光值都比其他组小很多？跪求分析！
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1楼 2016-06-11 11:56:57
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央宗兰泽

新虫 (初入文坛)
老师你好，我也在做这方面的实验，我想问一下，这个荧光素酶报告基因的是用什么仪器检测的，可以用酶标仪吗？还是荧光显微镜，如果是荧光显微镜的话，是普通的就可以还是的用倒置的？

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3楼2017-02-27 22:06:01
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查看全部 8 个回答

科研屌丝007

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道楼主是否已经解决你的问题？我发现你的空白中萤火虫、海肾数值都很高，我的实验中也有类似的结果，请问这是什么原因造成的呢?
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2楼2016-08-15 12:51:17
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 央宗兰泽 at 2017-02-27 22:06:01
老师你好，我也在做这方面的实验，我想问一下，这个荧光素酶报告基因的是用什么仪器检测的，可以用酶标仪吗？还是荧光显微镜，如果是荧光显微镜的话，是普通的就可以还是的用倒置的？
...

酶标仪检测，需要能够读化学发光的配制。
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4楼2017-02-28 09:13:49
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

按道理renilla的信号值在各分组应该是接近的，楼主各分组差异太大。还有W-NC 和m1-NC组luciferase的表达量差异比较大，做过几个月这个方法的优化，以我的经验估计楼主两次实验用的是同一批的质粒进行的。做这个实验对质粒的要求比较严格，特别是内毒素的水平，内毒素的差异会导致luciferase和renilla信号的差异化表达，楼主可以尝试再抽一批质粒转染看看。还有如果楼主是用脂质体转染的，建议做几个浓度比例看看脂质体对细胞有多大毒性伤害，renilla的信号都挺低的
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5楼2017-02-28 11:05:15
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