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dengsilong

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[求助] 新人跪求双荧光素酶报告基因结果分析 已有4人参与

最近刚做了双荧光素酶报告基因检测,结果很怪,双阳性组的荧光值明显比其它三组小很多(小3-10倍),但海肾/萤火虫比值却很乱,没有一致的显著差异,跪求有经验的前辈帮我分析一下,这实验重复过两次了,之前也是这种现象,谢谢各位前辈了!

下面是我的检测结果,行为复孔,列为组别,数据为萤火虫/海肾,上表为原始数据,下表为比例值(海肾/萤火虫比例值):

W-NC            18977/7207    16354/5558    18115/6571    18668/4417    19597/5203

W-miR           5499/1176      6886/1527       6773/1499      5150/1141      6153/1303

m1-NC         61454/11552   50625/8434     44676/8417    45236/9003    31294/5429

m1-miR        27912/6779     14634/4175     15290/3105   14509/4739     13403/3830

W-空白        36480/11301    32176/9439      26145/7979


W-NC    0.38    0.34    0.36    0.27    0.27

W-miR   0.21    0.22   0.22    0.22    0.21

m1-NC   0.19    0.17    0.19    0.20    0.17

m1-miR  0.24    0.29    0.20    0.33    0.29

W-空白   0.31    0.29    0.31


之前做过两次,大致情况相当,不知道为什么会这样,这算是阴性结果吗?可是为什么每次双阳性组荧光值都比其他组小很多?跪求分析!
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科研屌丝007

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道楼主是否已经解决你的问题?我发现你的空白中萤火虫、海肾数值都很高,我的实验中也有类似的结果,请问这是什么原因造成的呢?
2楼2016-08-15 12:51:17
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央宗兰泽

新虫 (初入文坛)

老师你好,我也在做这方面的实验,我想问一下,这个荧光素酶报告基因的是用什么仪器检测的,可以用酶标仪吗?还是荧光显微镜,如果是荧光显微镜的话,是普通的就可以还是的用倒置的?

发自小木虫Android客户端
3楼2017-02-27 22:06:01
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 央宗兰泽 at 2017-02-27 22:06:01
老师你好,我也在做这方面的实验,我想问一下,这个荧光素酶报告基因的是用什么仪器检测的,可以用酶标仪吗?还是荧光显微镜,如果是荧光显微镜的话,是普通的就可以还是的用倒置的?
...

酶标仪检测,需要能够读化学发光的配制。
4楼2017-02-28 09:13:49
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

按道理renilla的信号值在各分组应该是接近的,楼主各分组差异太大。还有W-NC 和m1-NC组luciferase的表达量差异比较大,做过几个月这个方法的优化,以我的经验估计楼主两次实验用的是同一批的质粒进行的。做这个实验对质粒的要求比较严格,特别是内毒素的水平,内毒素的差异会导致luciferase和renilla信号的差异化表达,楼主可以尝试再抽一批质粒转染看看。还有如果楼主是用脂质体转染的,建议做几个浓度比例看看脂质体对细胞有多大毒性伤害,renilla的信号都挺低的
5楼2017-02-28 11:05:15
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某年仲夏

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

请问我们用的也是promega试剂盒做的,扫吸光度560和480吗,我们扫出来的数值特别小,在0.07左右,这样是不是不对啊?求问
6楼2017-03-12 16:25:43
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有一场花开

新虫 (初入文坛)

我拿E2920做的,多功能酶标仪测出来海肾值很低,CV值很大,不知道怎么办了

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-05-05 11:50:21
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吉林小糊涂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我也有这样的问题,想问你,你的解决了吗?
8楼2018-09-23 12:56:56
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