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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

11楼2016-06-10 14:06:24
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

小盆友,我最拿手的就是引物设计,我做过几十种PCR呢,你说的巢式,我可以告诉你,基本没意义,你的目的是得到靶序列全长(含有5‘和3’端)即可,增强效果没意义,你看过的那些都是旧黄历了,现在你应该跟上时代
奋斗是我们前进的动力!
12楼2016-06-10 14:07:02
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-10 14:07:02
小盆友,我最拿手的就是引物设计,我做过几十种PCR呢,你说的巢式,我可以告诉你,基本没意义,你的目的是得到靶序列全长(含有5‘和3’端)即可,增强效果没意义,你看过的那些都是旧黄历了,现在你应该跟上时代

说明书就这么写的啊,我的物种已知的基因屈指可数,我没办法验证引物的特异性,只能做巢式咯

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13楼2016-06-10 14:11:10
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

需要做RACE的大部分基因和物种都是如此,所以我才采用地毯式轰炸的方法,不管出现几个条带,全部切下来送走测序,不能忽略任何一个结果
奋斗是我们前进的动力!
14楼2016-06-10 14:39:26
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armigera

金虫 (正式写手)

你的RACE还没出来啊~
对于未知基因序列,要根据保守区域设计兼并引物拿到特异序列。直接用保守区域设计的引物扩RACE很不好,因为所有的cDNA序列都有通用引物的adaptor,用不确定的引物很难扩出自己的目的基因

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15楼2016-06-10 14:43:36
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armigera

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-10 14:07:02
小盆友,我最拿手的就是引物设计,我做过几十种PCR呢,你说的巢式,我可以告诉你,基本没意义,你的目的是得到靶序列全长(含有5‘和3’端)即可,增强效果没意义,你看过的那些都是旧黄历了,现在你应该跟上时代

真的假的?

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16楼2016-06-10 14:45:31
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by armigera at 2016-06-10 14:45:31
真的假的?
...

有必要骗你么,我还用过最开始的那种很麻烦的PCR方法呢,就是rTaq发现之前的那种PCR,给你举个例子,你做过降落PCR和锅饼PCR么
奋斗是我们前进的动力!
17楼2016-06-10 14:49:14
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armigera

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-10 14:49:14
有必要骗你么,我还用过最开始的那种很麻烦的PCR方法呢,就是rTaq发现之前的那种PCR,给你举个例子,你做过降落PCR和锅饼PCR么...

做过~

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18楼2016-06-10 14:49:53
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
15楼: Originally posted by armigera at 2016-06-10 14:43:36
你的RACE还没出来啊~
对于未知基因序列,要根据保守区域设计兼并引物拿到特异序列。直接用保守区域设计的引物扩RACE很不好,因为所有的cDNA序列都有通用引物的adaptor,用不确定的引物很难扩出自己的目的基因
...

我搞不到保守区啊

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19楼2016-06-10 14:50:04
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armigera

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-10 14:49:14
有必要骗你么,我还用过最开始的那种很麻烦的PCR方法呢,就是rTaq发现之前的那种PCR,给你举个例子,你做过降落PCR和锅饼PCR么...

因为以前我们研究的昆虫在ncbi genbank上没有基因组数据库,所以为了找差异做过差减杂交,dd-pcr,为了拿一些基因序列做过兼并引物pcr,拿全长用了RACE,有些引物省的摸条件中间试过touchdown pcr。甚至为了确定转录启始位点自己做过测序电泳。
估计我们是差不多年纪的

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20楼2016-06-10 14:56:27
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