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61930979

金虫 (小有名气)

[交流] 求助:蛋白表达

载体构建后经测序序列完全正确,可是37度诱导5h后检测无蛋白表达,我们表达的是毒性蛋白,用的载体是pET系列,表达菌是BL21,请教各位如何确定毒性蛋白的表达条件。
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sunbinice

银虫 (初入文坛)

试着低温诱导看看,有毒性的蛋白诱导是很麻烦
2楼2008-11-04 19:00:23
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61930979

金虫 (小有名气)

低温到底是多少度??30度?25度?还是????
3楼2008-11-04 20:10:19
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sunbinice

银虫 (初入文坛)

我们这边有人16度诱导过夜的
4楼2008-11-04 20:29:41
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hongjulee

铜虫 (小有名气)

做几个温度条件,还有不同的IPTG浓度等,就是对诱导条件做一个优化。
5楼2008-11-04 22:24:59
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

表达的温度,时间,诱导剂的量都需要摸索一下,也有可能是5小时后表达的东西都降解了也说不准。定时取样检测看看。
金币是赌出来的
6楼2008-11-05 10:22:41
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61930979

金虫 (小有名气)

谢谢各位了,我们再做几个条件摸索一下
7楼2008-11-05 12:51:18
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

说不定把你的菌毒死了.
8楼2008-11-05 14:40:35
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