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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白表达
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61930979

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：蛋白表达

载体构建后经测序序列完全正确，可是37度诱导5h后检测无蛋白表达，我们表达的是毒性蛋白，用的载体是pET系列，表达菌是BL21，请教各位如何确定毒性蛋白的表达条件。
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1楼 2008-11-04 16:39:20
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sunbinice

银虫 (初入文坛)
试着低温诱导看看，有毒性的蛋白诱导是很麻烦
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2楼2008-11-04 19:00:23
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61930979

金虫 (小有名气)
低温到底是多少度？？30度？25度？还是？？？？
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3楼2008-11-04 20:10:19
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sunbinice

银虫 (初入文坛)
我们这边有人16度诱导过夜的
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4楼2008-11-04 20:29:41
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hongjulee

铜虫 (小有名气)
做几个温度条件，还有不同的IPTG浓度等，就是对诱导条件做一个优化。
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5楼2008-11-04 22:24:59
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
表达的温度，时间，诱导剂的量都需要摸索一下，也有可能是5小时后表达的东西都降解了也说不准。定时取样检测看看。
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金币是赌出来的
6楼2008-11-05 10:22:41
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61930979

金虫 (小有名气)
谢谢各位了，我们再做几个条件摸索一下
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7楼2008-11-05 12:51:18
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
说不定把你的菌毒死了．
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8楼2008-11-05 14:40:35
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