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61930979

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[交流] 求助：蛋白表达

载体构建后经测序序列完全正确，可是37度诱导5h后检测无蛋白表达，我们表达的是毒性蛋白，用的载体是pET系列，表达菌是BL21，请教各位如何确定毒性蛋白的表达条件。

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烦躁已经有5人回复
寻找合作团队已经有4人回复

1楼 2008-11-04 16:39:20

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sunbinice

银虫 (初入文坛)

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试着低温诱导看看，有毒性的蛋白诱导是很麻烦

2楼2008-11-04 19:00:23

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61930979

金虫 (小有名气)

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低温到底是多少度？？30度？25度？还是？？？？

3楼2008-11-04 20:10:19

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sunbinice

银虫 (初入文坛)

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我们这边有人16度诱导过夜的

4楼2008-11-04 20:29:41

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hongjulee

铜虫 (小有名气)

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做几个温度条件，还有不同的IPTG浓度等，就是对诱导条件做一个优化。

5楼2008-11-04 22:24:59

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wjswj

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表达的温度，时间，诱导剂的量都需要摸索一下，也有可能是5小时后表达的东西都降解了也说不准。定时取样检测看看。

金币是赌出来的

6楼2008-11-05 10:22:41

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61930979

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谢谢各位了，我们再做几个条件摸索一下

7楼2008-11-05 12:51:18

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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

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说不定把你的菌毒死了．

8楼2008-11-05 14:40:35

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