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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求助大神，单抗纯化后重链出现两条带
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wzy_wry

铁杆木虫 (职业作家)

英子

[求助] 求助大神，单抗纯化后重链出现两条带 已有1人参与

单克隆抗体是腹水中纯化得来，细胞也是克隆完全了的，单克隆抗体经过Protein A纯化后，SDS-PAGE重链附近有两条带，（该抗体多个批次纯化后都是这种结果）其中一条是杂带呢?还是电泳样品处理过程中的问题，其实是一个抗体？有没有大神遇到过类似的情况，求解答？小女子不胜感谢！
图中顺序依次为marker，纯化前单抗，纯化后单抗

求助大神，单抗纯化后重链出现两条带
20160525_副本.jpg
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1楼 2016-06-06 15:01:35
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wzy_wry: 金币+2, ★有帮助 2016-06-08 08:58:29
杂带。一次亲和层析完全去除杂蛋白几乎不可能，可尝试在Protein A纯化前加离子交换的。祝顺利
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2楼2016-06-07 10:17:55
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匿名

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3楼2016-06-08 10:27:52
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wzy_wry

铁杆木虫 (职业作家)

英子
引用回帖:
3楼: Originally posted by louis_cheung at 2016-06-08 10:27:52
一般抗体用Protein A纯化后纯度达90%以上，一般不会出现明显肉眼可见杂带。亲跑的还原电泳，重链之上有一条带。那用该抗体跑非还原电泳是否有这一条带？还是在完整抗体条带之上有一新条带？
...

非还原电泳暂时没跑，但是如果不是杂带，为什么会出现两条带呢？
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4楼2016-06-12 09:07:41
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匿名

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5楼2016-09-25 23:32:01
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