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zr340721

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达引物设计为什么要添加酶切位点?

酶切位点的设计原则

发自小木虫IOS客户端
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FHheh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物的结构:5’端—保护碱基+酶切位点+引物配对区—3’端—保护碱基
①酶切位点应是载体上的,所连接片断上没有这两个位点,且距离不能太近;
②最好使用双酶切效率高的,但两个酶切点最好不要是同尾酶;
③退一般退火温度为Tm-5度,退火温度的计算可以不把加入的酶切位点及保护碱基考虑进去;
④关于引物二聚体,最好用primer或是其他设计引物的软件进行计算一下
2楼2016-06-07 16:29:05
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