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zr340721

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达引物设计为什么要添加酶切位点？

酶切位点的设计原则

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1楼 2016-06-04 08:01:25
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FHheh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物的结构：5’端—保护碱基+酶切位点+引物配对区—3’端—保护碱基
①酶切位点应是载体上的，所连接片断上没有这两个位点，且距离不能太近；
②最好使用双酶切效率高的，但两个酶切点最好不要是同尾酶；
③退一般退火温度为Tm-5度，退火温度的计算可以不把加入的酶切位点及保护碱基考虑进去；
④关于引物二聚体，最好用primer或是其他设计引物的软件进行计算一下
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2楼2016-06-07 16:29:05
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