| 查看: 1748 | 回复: 6 | |||
[交流]
cas9靶位点基因退火 已有3人参与
|
|
最近在做cas9，靶位点20bp基因退火然后做大肠杆菌转化，一直转化不成功，求各位指点一下。用的一下程序。 退火：F位点序列2ul ， R位点序列 2ul ，tap buffer2ul ，dd水14ul。94℃10min冷却至室温。 质粒酶切：BsaI酶1ul，buffer5ul，质粒10ul，dd水34ul。37℃60min。然后65℃热失活20min。 5段磷酸化：退火产物5ul，T4PNK酶1ul，10xbuffer2ul，dd水12ul。37℃30min T4连接酶链接:靶位点dna3ul，载体1ul，T4酶0.5ul，buffer2ul，dd水3.5ul。25℃90min。 用以上步骤总是连接不上，不知哪里出了问题。求各位指点。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有55人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10321749&authorid=2621902 上次我就和你说去看我回复别人的帖子。。然后又看到你再问。。 |
2楼2016-06-03 22:49:46
3楼2016-06-03 23:25:43
4楼2016-06-04 09:02:04
5楼2016-06-04 09:02:37
6楼2016-06-04 09:03:40
7楼2016-08-14 12:19:00
5