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cas9靶位点基因退火 已有3人参与
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最近在做cas9，靶位点20bp基因退火然后做大肠杆菌转化，一直转化不成功，求各位指点一下。用的一下程序。 退火：F位点序列2ul ， R位点序列 2ul ，tap buffer2ul ，dd水14ul。94℃10min冷却至室温。 质粒酶切：BsaI酶1ul，buffer5ul，质粒10ul，dd水34ul。37℃60min。然后65℃热失活20min。 5段磷酸化：退火产物5ul，T4PNK酶1ul，10xbuffer2ul，dd水12ul。37℃30min T4连接酶链接:靶位点dna3ul，载体1ul，T4酶0.5ul，buffer2ul，dd水3.5ul。25℃90min。 用以上步骤总是连接不上，不知哪里出了问题。求各位指点。。。。 |
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kangaroo0513
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10321749&authorid=2621902 上次我就和你说去看我回复别人的帖子。。然后又看到你再问。。 |
2楼2016-06-03 22:49:46
3楼2016-06-03 23:25:43
4楼2016-06-04 09:02:04
5楼2016-06-04 09:02:37
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7楼2016-08-14 12:19:00