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那片碧海蓝天

铁杆木虫 (正式写手)

金世纪

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[求助] 基因工程菌问题已有1人参与

我们采用基因工程菌中试，前2个月是好的，3个月以后菌株可能质粒丢失了，中试也过不去~~
主要以下现象：1）菌株显微镜下镜检变球状，先前是大肠，短杆状。
2）有的菌株显微镜下镜检变粗杆菌，好像长胖了。
3）以上两种菌发酵进行不下去，要么死了，要么全变球菌，无效价。
请问各位大侠，这是菌株质粒丢失了吗？
若是，我们如何做？或如何挽回？

我们可以从原始菌株里提取质粒重新转化感受态吗？

或者我们从发酵液分离菌体出来重新提取质粒，再转化宿主感受态，筛选出正常菌株？这样可以吗？

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谦虚谨慎!

1楼 2016-06-01 17:10:06

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原海亮

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

这个检验质粒是否丢失应该比较简单吧，你们首先可以将原始菌种在抗性平板上画单菌落纯化，然后挑取单菌落到抗性培养基中培养，提取质粒做一下验证，这样既可以活化菌株又可以验证质粒是否丢失。一般发酵出现问题我们都是先单菌落纯化培养，重新挑取菌种进行发酵，看是否正常，另外发酵过程中是否会出现污染等情况呢？最后的选择当然是可以将质粒重新转化表达的，但发酵条件应该实验下，看是否需要重新优化，祝好。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！

2楼2016-06-01 21:37:00