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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 大家现在做大肠杆菌敲除应用无痕敲除的效果好吗？
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 大家现在做大肠杆菌敲除应用无痕敲除的效果好吗？ 已有4人参与

大家现在做大肠杆菌的敲除是用Red重组系统吗？但是它会留下FRT的标记，有用无痕敲除
做的好的吗？实验效率和周期怎么样？
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1楼 2016-06-01 12:50:39
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Red的话，大概两周就可以搞定一个基因

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2楼2016-06-01 12:54:24
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-01 12:54:24
Red的话，大概两周就可以搞定一个基因

两周敲一个基因，这是最快的速度吗？我听说只要4-5天就能搞定一个基因的。
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3楼2016-06-01 13:02:12
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的引物合成，菌活化，载体检测等过程啊

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4楼2016-06-01 13:04:24
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
不包括进去吗

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5楼2016-06-01 13:04:50
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-01 13:04:50
不包括进去吗

是整个实验周期：今天做第一次同源重组，涂抗性平板；第二天在抗性平板上做菌落PCR验证，用PCR验证正确的
菌接菌过夜培养；第三天做二次重组，预培养菌液到负筛培养基中富集培养过夜；第四天过夜培养液在负筛抗性
平板划线培养；第五天挑单菌落在平板上PCR验证，最快的速度就是5天就够了。这里的方法是其它实验室的cat-sacB
筛选方法。
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6楼2016-06-01 13:13:26
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
你想说明什么呢

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7楼2016-06-01 13:16:25
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做实验之前的准备阶段不算吗？

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8楼2016-06-01 13:17:00
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-06-01 13:17:00
做实验之前的准备阶段不算吗？

因为这是40bp的同源臂，做个PCR就可以完成，所以基本不花多少时间。
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9楼2016-06-01 14:10:02
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elitewjj

木虫 (正式写手)
★
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有人试过Crispr/cas9敲除吗

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10楼2016-06-03 06:30:01
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